李秀秀，汪 琦

（1.德州市德城区疾病预防控制中心，山东德州 253000；2.乐陵市疾病预防控制中心，山东德州 253600）

沙门氏菌（Salmonella）是一类常见的食源性病原菌，为革兰氏阴性杆菌，被认为是食品和水源中最主要的致病菌之一[1]。全球每年有数百万人因摄入受污染的食物或水而感染沙门氏菌，导致食物中毒，对公共卫生构成严重威胁[2]。因此，对食品、水源的生产、运输、销售过程中的沙门氏菌进行检测至关重要。

随着生物技术的不断发展，聚合酶链式反应技术（Polymerase Chain Reaction，PCR）、酶联免疫法、恒温荧光核酸检测法等各种快速检测技术被应用于沙门氏菌的检测中。其中，PCR技术是最常用的方法之一[3]。但PCR技术也存在一定的局限性，其需要专门的实验室设备和技术人员进行操作，且对样品预处理和提取DNA的要求较高[4]。选择性培养基通过优化培养条件，使目标微生物得以生长和繁殖，同时限制其他微生物的生长，从而实现高特异性的检测，被广泛应用于分离、鉴定和定量目标微生物[5]。

本研究通过比较不同选择性培养基对沙门氏菌检测效果的影响，筛选适用于沙门氏菌检测的培养基，为沙门氏菌的快速检测提供科学依据，为食品安全监管和公共卫生管理提供支持。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

目标菌株：鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、甲型副伤寒沙门氏菌CMCC（B）50093。干扰菌株：粪肠球菌ATCC29212、奇异变形杆菌CMCC（B）49005、大肠埃希氏菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。亚硫酸铋琼脂培养基；沙门氏菌显色培养基；HE琼脂培养基；木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基；营养琼脂培养基（复苏培养基）；即用型胰蛋白胨大豆琼脂培养基（参比培养基）；恒温培养箱；酒精灯；无菌培养皿；纯化水。

1.2 待测菌株的检测

先进行平板制备，分别取47.3 g亚硫酸铋琼脂培养基干粉、34.9 g沙门氏菌显色培养基干粉、90.8 g HE琼脂培养基产品干粉、57.0 g木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基产品颗粒制备培养基和32.0 g营养琼脂培养基，将称量好的样品与1000 mL纯化水混合加热，不断搅拌至完全溶解，冷却至50 ℃后倒入无菌培养皿中（至少3 mm厚），置于平台上半开盖至琼脂凝固后盖盖备用。

将不同菌株接种在营养培养基上置于恒温培养箱中36 ℃培养1 d进行菌株复苏，再将不同菌株分别接种在亚硫酸铋琼脂培养基、沙门氏菌显色培养基、HE琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基上，目标菌株采用平均涂布，干扰菌株采用平板划线（图1），再次置于恒温培养箱中36 ℃培养2 d后进行鉴定。

图1 干扰菌株平板划线示意图（GB 4789.28—2013）

1.3 鉴定原理

亚硫酸铋琼脂培养基内的亚硫酸盐可被沙门氏菌还原成硫化物，生成的硫化物与硫酸亚铁反应后可使菌落呈现黑色。

沙门氏菌显色培养基中混合色素与沙门氏菌内部特异性酶进行反应，使沙门氏菌群落呈紫红色。

HE琼脂培养基中的硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵可与部分可发酵糖类的沙门氏菌产生的硫化氢反应，该反应可使菌落中心部位呈黑色，从而实现对沙门氏菌的检测；同时培养基中的麝香草酚蓝等酸碱指示剂也可将群落显色为橘黄色群落和蓝绿色群落，用于鉴定菌种。

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基中的木糖经沙门氏菌发酵后产生酸，酸性环境促进沙门氏菌产生脱羧酶使XLD琼脂培养基中的赖氨酸脱羧，导致培养基内pH值不断升高形成碱性环境，在碱性环境下硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵与沙门氏菌产生的硫化氢反应使群落呈黑色。

1.4 生长率和选择性测定

采用生长率评价目标菌的检测结果，生长率的计算公式为

式中：Pr为生长率；Ns为待测培养基平板上的菌落总数，CFU；N0为和参比培养基平板上的菌落总数，CFU。

采用生长指数（G）作为干扰菌检测结果的评价指标，根据每条划线上菌落的生长情况计算生长指数（0≤G≤6），其评价标准如表1所示。

表1 生长指数（G）的评价标准

2 结果与分析

2.1 不同培养基上目标菌的生长情况

如表2所示，在亚硫酸铋琼脂培养基中，鼠伤寒沙门氏菌易于被检出，菌落颜色呈黑色并带金属光泽，而甲型副伤寒沙门氏菌相对较难检出，其菌落颜色呈现暗绿色，易与其他绿色系菌落混淆（如铜绿假单胞菌），这与甲型副伤寒沙门氏菌不发酵糖类产生硫化氢有关。沙门氏菌显色培养基中鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌均有特异性反应。HE琼脂培养基中鼠伤寒沙门氏菌菌落中心呈黑色，相较于甲型副伤寒沙门氏菌更易被检出。木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基中鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌均呈浅红色菌落且中心呈黑色，检测效果较好。

表2 目标菌的菌落生长情况

2.2 不同培养基上干扰菌的生长情况

如表3所示，4种培养基中，粪肠球菌均受到明显的抑制，奇异变形杆菌在沙门氏菌显色培养基被抑制。除木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基中的奇异变形杆菌难与鼠伤寒沙门氏菌相区分外，其他条件下均可与沙门氏菌区分。

表3 干扰菌的菌落生长情况

2.3 不同培养基目标菌的生长率

如表4所示，4种培养基中，鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌的生长率均较高（＞0.70）。其中，亚硫酸铋琼脂培养基中的2种沙门氏菌生长率最高；沙门氏菌显色培养基中的2种沙门氏菌生长率最低。

表4 不同培养基目标菌的生长率

2.4 不同培养基干扰菌的选择性

如表5所示，粪肠球菌在4个培养基中的生长指数均小于3，说明4个培养基对以粪肠球菌为代表的革兰氏阳性菌有明显的抑制作用；而由于培养基的设计不同，沙门氏菌显色培养基对奇异变形杆菌、亚硫酸铋琼脂培养基对大肠埃希氏菌也表现出了明显的抑制作用。奇异变形杆菌和大肠埃希氏菌在HE琼脂培养基以及铜绿假单胞菌在4种培养基中均表现出了一定程度的生长，但其菌落特点与沙门氏菌存在一定差异，故这些培养基也可作为这些干扰菌的选择性培养基。

表5 不同培养基干扰菌的生长指数

3 结论

本研究通过比较4种不同选择性培养基对沙门氏菌的检测效果发现，鼠伤寒沙门氏菌在亚硫酸铋琼脂培养基、沙门氏菌显色培养、HE琼脂培养基和木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基中较易分辨；而甲型副伤寒沙门氏菌因不产硫化氢，在亚硫酸铋琼脂培养基和HE琼脂培养基中较难区分。4种干扰菌中，除木糖赖氨酸脱氧胆酸盐培养基中的奇异变形杆菌，其他条件下均可与沙门氏菌区分；4种培养基中，鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌的生长率均较高（＞0.70）；4种培养基对革兰氏阳性菌有明显的抑制作用。