王小洁,张云锋,张彦敏

1.邯郸市妇幼保健院中医妇科,邯郸 056000; 2.河北省沧州中西医结合医院中医专家门诊,沧州 061000;3.石家庄市井陉矿区人民医院内科,石家庄 050100

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome, PCOS)发病原因复杂,表现出长期无排卵或稀发排卵的高雄激素特征,严重影响患者的青春期心理、育龄期机体代谢等[1-2]。淫羊藿是我国传统的滋补类中草药,能增强机体性功能和免疫功能,在临床常被用于辅助治疗PCOS[3-4]。淫羊藿苷(icariin, ICA)作为淫羊藿的主要有效成分之一,具有抗氧化、抗癌、抗血管生成和抗炎等多种药理活性[5]。本研究用脱氢表雄酮法建立PCOS小鼠模型,研究ICA对PCOS小鼠排卵障碍和卵泡发育的影响及作用机制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

微量移液器(德国Eppendorf公司);HM355S全自动轮转式石蜡切片机(德国MICON医疗技术有限公司);PowerPac电泳仪(美国Bio-Rad公司)。

1.2 试药

脱氢表雄酮(上海恒渡生物科技有限公司);淫羊藿苷(质量分数≥98%,上海吉至生化科技有限公司);雌二醇(estradiol, E2)、睾酮激素(testosterone, T)、促黄体生成激素(luteinizinghor mone, LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)和抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)ELISA试剂盒,均购自武汉华美生物工程有限公司;兔抗小鼠生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF-9)、骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein type Ⅱ receptor, BMPR-Ⅱ)、激活素受体样激酶5(activin receptor like kinase 5, ALK5)、Smad蛋白2(Smad protein 2, Smad2)、p-Smad2、p-Smad3、Smad3一抗和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔Ig G,均购自美国Abcam公司。

1.3 动物

雌性C57BL/6小鼠50只,SPF级,4周龄,体质量为(12±1) g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号SCXK(沪)2017-0005。

2 方法

2.1 PCOS模型的建立

用阴道组织涂片法连续20 d对50只小鼠阴道细胞涂片进行动情周期观察,随机选择动情周期完整的40只小鼠,于每日上午9点在小鼠颈背部皮下注射60 mg·kg-1脱氢表雄酮(溶于注射用橄榄油0.2 mL),另取10只小鼠作为对照组,于相同时间注射橄榄油0.2 mL,均连续注射21 d[6]。……