张建丰,梁 琦,李刚刚,延保国*

1. 西安市第八医院药剂科,西安 710061; 2. 西北大学生命科学学院,西安 710069

创新药物研发是当前国际科技竞争的战略制高点之一,往往耗资巨大、耗时长久。在创新药物研发进程中,先导化合物的成药性评价对于降低药物研发风险、提升研发成功率具有重大意义。目前,先导化合物的成药性评价方法主要包括体内的吸收、分布、代谢、排泄以及毒性评价等,存在消耗时间长、样品需求大量等不足,尤其是该评价过程无法证明化合物的作用靶点及作用方式,因此,亟需开发一种准确、快速、易于操作的先导化合物的成药性评价方法。

亲和色谱[1-3]具有高通量和高重复性的特点,目前已经成功应用于药物-受体相互作用的分析,该方法的应用首先需要合成受体色谱固定相,WAINER I W等已经成功实现了多种G蛋白偶联受体(G-protein coulped receptor, GPCR)色谱固定相的制备,包括β2肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)[4]、烟碱型受体[5]、阿片样受体[6]、嘌呤受体[7]及大麻素受体[8]等,但以上受体色谱固定相均用物理吸附法制备,无法耐受色谱分析过程中流动相的持续洗脱,因此其稳定性较差。

为了解决上述问题,将卤代烷烃脱卤素酶标签(halo-genated alkane dehalogenase tagged, Halo-tagged)融合至受体的非活性末端,经诱导表达获得Halo标记的GPCR可通过生物正交反应一步固定至大孔微球表面[9]。用该方法制备的受体色谱固定相具有与初始受体相当的活性,可用于药物-受体相互作用分析和中药靶向活性成分筛选。在文献基础上[10],本课题组用该方法制……