范学亮， 王中山， 王春锋

（郑州金域临床检验中心 病理科， 河南 郑州 450016）

三阴性乳腺癌 （TNBC） 是雌激素受体、 孕激素受体、 表皮生长因子2 均表达为阴性的一类乳腺癌。 相比其他乳腺癌，TNBC 的发病年龄更小， 侵袭性更强， 对激素不敏感， 预后较差， 严重危及患者生命［1］。 1－磷酸神经鞘氨醇受体1 （S1PR1）是具有生物活性的鞘脂类代谢物， 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－3（Caspase－3） 是Caspase 家族的一种［2］。 研究［3］显示S1PR1、Caspase－3 在肿瘤细胞的增殖、 侵袭过程中起到了重要作用，而TNBC 的发生发展离不开细胞的异常增殖。 本研究探讨S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 中的表达及其与病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料回顾性分析2021 年8 月至2022 年8 月我中心76 例乳腺癌患者的病历资料， 其中TNBC 患者20 例 （TNBC组）， 非TNBC 患者56 例 （非TNBC 组）。

1.2 检测方法①标本处理。 将术中切除的乳腺癌组织标本用10%中性福尔马林固定， 石蜡包埋， 切片机连续4 μm 切片；之后将标本切片放在烤片机上烘烤2 h， 并在60 ℃恒温箱中静置一夜。 ②检测操作。 采用免疫组化EnVision 法染色并检测标本组织中S1PR1、 Caspase－3 表达。 在0.01 mmol／L 柠檬酸钠缓冲液中高温高压修复切片抗原， 先用3% H2O2孵育20 min， 再用5% BSA 封闭30 min， 分别 滴加S1PR1、 Caspase－3 一抗，在4 ℃下孵育过夜； 在室温下滴加HRP 标记的抗兔IgG 孵育50 min， 并通过DAB 显色； 之后用苏木精复染、 脱水、 封片。 以阳性组织切片作为阳性对照， 以PBS 液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定采用数字切片扫描仪将免疫组化切片转换为数字切片， 并用相关软件进行图像处理判读。 细胞浆内呈现棕色或浅棕色颗粒为Caspase－3 阳性细胞， 细胞质呈棕黄色为S1PR1 阳性细胞。 染色强度按比例计数后， 根据百分比进行分类， 细胞总数200 个， 阳性细胞占比≤5%为阴性 （－）， 5%＜阳性细胞≤25%为弱阳性 （＋）， 25%＜阳性细胞≤50%为阳性（＋＋）， 阳性细胞＞50%为强阳性 （＋＋＋）。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0 统计软件处理数据。 计量资料以±s 表示， 采用t 检验； 计数资料以n （%） 表示， 采用χ2检验。 P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病理特征TNBC 组年龄≤50 岁11 例， ＞50 岁9 例；绝经前9 例， 绝经后11 例； 肿瘤直径≤2 cm 8 例， 肿瘤直径＞2 cm 12 例； 有淋巴结转移9 例， 无淋巴结转移11 例； TNM 分期Ⅰ期6 例， Ⅱ期9 例， Ⅲ期5 例； 组织学分级Ⅰ级3 例， Ⅱ级12 例， Ⅲ级5 例。 非TNBC 组年龄≤50 岁31 例， ＞50 岁25例； 绝经前23 例， 绝经后33 例； 肿瘤直径≤2 cm 21 例， 肿瘤直径＞2 cm 35 例； 有淋巴结转移36 例， 无淋巴结转移20例； TNM 分期Ⅰ期17 例， Ⅱ期26 例， Ⅲ期13 例； 组织学分级Ⅰ级8 例， Ⅱ级42 例， Ⅲ级6 例。 两组的临床病理特征均无明显差异 （P ＞0.05）。

2.2 S1PR1、 Caspase－3 表达TNBC 组标本中S1PR1、 Caspase－3 的阳性表达率高于非TNBC 组 （P ＜0.05）。 见表1。

表1 两组乳腺癌标本中的S1PR1、 Caspase－3 表达比较 ［n （%）］

2.3 S1PR1、 Caspase－3 阳性表达与TNBC 病理特征的关系不同年龄、 月经状况、 肿瘤直径、 组织学分级的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表达无明显差异 （P ＞0.05）； 但不同淋巴结转移情况、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表达存在差异 （P ＜0.05）。 见表2。

表2 S1PR1、 Caspase－3 阳性表达与TNBC 病理特征的关系［n （%）］

3 讨论

TNBC 作为乳腺癌的一种， 因其恶性度高且无靶向药物治疗指征而受到临床关注。 在基因表达谱上， TNBC 具有显著的分子水平上的异质性， 且该种异质性使得其生物学行为存在差异， 所以需要进一步对其进行分析， 以便更好地进行分类管理。 S1PR1 是S1PR 的一种， 与已发现的其他4 种S1PR 都属于G 蛋白偶联受体， 既参与了细胞生长、 分化、 迁移、 免疫应答等生理过程， 又在多种恶性肿瘤的发生、 发展中起到了一定作用［4］。 Caspase－3 所在的Caspase 家族是调控细胞凋亡的核心机制， 被认为是Caspase 家族最关键的一类凋亡执行细胞。当Caspase－3 表达减弱或缺失时， 可能会导致细胞异常增殖或恶性转化， 在多种恶性肿瘤的发生发展中起到了重要作用。

本研究结果显示， TNBC 组标本中S1PR1、 Caspase－3 的阳性表达率高于非TNBC 组 （P ＜0.05）， 提示S1PR1、 Caspase－3在TNBC 中表达升高。 研究［5］表明， Caspase－3 在乳腺癌组织中的表达与患者的年龄、 月经状况无关 （P ＞0.05）， 与TNM 分期及淋巴结转移情况有关 （P ＜0.05）。 本研究结果显示， 不同年龄、 月经状况、 肿瘤直径、 组织学分级的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表达无显著差异 （P ＞0.05）， 但不同淋巴结转移情况、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表达存 在 显 著 差 异 （P ＜0.05）， 提 示S1PR1、 Caspase－3 表 达 与TNBC 患者的年龄、 月经状况、 肿瘤直径、 组织学分级无关，与淋巴结转移情况、 TNM 分期有关。 王娟等［6］的研究结果显示， S1PR1 表达与TNBC 患者年龄、 肿瘤直径及临床分期无关（P ＞0.05）， 但S1PR1 高表达TNBC 患者的组织学分级高、 淋巴结转移率高 （P ＜0.05）， 与本研究结果一致。

综上所述， S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中表达升高，且两者的表达与淋巴结转移情况、 TNM 分期具有密切联系。S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中的表达特性可以为临床诊断TNBC 及未来研发更有效的治疗靶点药物提供新的方向。