毛海婵,杨丽玲,曾文军,李明,郑武娟,陈剑钊,袁绍辉,阮建波

痤疮丙酸杆菌(Cutibacteriumacnes,C.acnes)是痤疮的重要致病因素之一,它通过激活炎症因子及受体来激活先天性免疫促进痤疮的发生[1]。临床上广泛应用抗生素抑制或杀灭C.acnes达到治疗效果,但近年来C.acnes的耐药现象日益增加,尤以大环内酯类抗生素耐药更为显著[2]。耐药性的出现及加重不仅增加治疗难度,且会导致耐药性以及耐药基因在不同细菌中转移[3]。细菌存在外排泵是导致对抗生素耐药的重要原因[4]。外排泵是细菌对大环内酯类抗生素耐药的重要机制之一[5],此前尚未见耐药C.acnes与外排泵相关报道,笔者前期研究发现耐阿奇霉素C.acnes中存在外排泵阳性现象[6],本研究对阿奇霉素外排阳性的耐药C.acnes进行外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(Carbonyl cyanide-3-chlorophenylhydrazone,CCCP)处理、转录组测序(RNA-Seq),挖掘CCCP处理前后的菌株转录本差异,加深对C.acnes外排泵基因表达的理解,进一步深入研究C.acnes耐药机制,从而指导临床治疗。

1 材料与方法

1.1菌株 标准菌株1株:ATCC6919痤疮丙酸杆菌,购于广东省微生物菌种保藏中心。临床分离对阿奇霉素耐药的痤疮丙酸杆菌1株:编号64(沿用前期标本收集编号),来源于暨南大学附属东莞医院皮肤科门诊痤疮患者。课题组前期已对64号菌进行了药敏试验,药敏结果显示阿奇霉素MIC值>256 μg/mL,并且基因检测结果显示该菌株携带ermX基因,但不含23S rRNA点突变[7-8]。

1.2试剂、仪器 阿奇霉素,中国食品药品检定研究院。CCCP,美国洛杉矶PANPHY化学公司。厌氧血琼脂平板、布氏血琼脂培养基,江门市凯林贸易有限公司。V……