王长亮,田文静,黄景荣,计春燕,王 慧,赵 莉,孙 俊

(1.湖北省中西医结合医院消化内科,湖北 武汉 430010;2.广州医科大学附属第一医院肿瘤科,广东 广州 510120)

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,病死率较高[1]。胃癌发病率在全球呈现增长趋势,同时其发病年龄逐渐年轻化[2]。尽管胃癌的诊断和治疗有了较大发展,但胃癌患者的5年生存率依然较低[3]。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)在人体细胞中广泛表达,通过直接或者间接与染色体、微小RNA(microRNA,miR)、蛋白结合,调控相应基因的转录和表达,在维持染色体稳定方面发挥重要作用[4]。相关文献[5-6]证实,甲状腺癌、胸腺癌、淋巴瘤以及胃癌等组织中存在lncRNA的异常表达,其通过影响各种分子信号通路转导参与肿瘤的发生及进展。lncRNA C16orf89是一个由582个碱基组成的长链非编码RNA,其在胃癌组织及细胞系中表达模式和功能尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA C16orf89在胃癌中的表达模式,通过体外实验分析过表达lncRNA C16orf89对胃癌细胞增殖和侵袭的作用,通过生物信息学技术进一步分析lncRNA C16orf89可能的下游机制。

1 材料与方法

1.1 实验细胞 胃癌细胞系BGC823、AGS、NCI-N87细胞(购自美国ATCC公司)在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养,胃癌细胞系SGC7901、HS-746T和永生化胃上皮细胞GES-1细胞(购自美国ATCC公司)在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,在37 ℃、5% CO2条件下加湿培养。

1.2 主要试剂 胎牛血清(FBS)(批号:10100-147)购自美国Gibco公司;DMEM培养基和RPMI-1640培养基(批号:GT65-165、GT65-128)购自日本TOYOBO公司;lncRNA C16orf89过表达质粒pcDNA3-lncRNA C16orf89、阴性对照质粒pcDNA3-NC、miR-NC、miR-95-3p(批号:GNM25-113、GNM25-114、GNM25-115、GNM25-116)购自北京中杉金桥生物公司;噻唑蓝(MTT)试剂盒、实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)试剂盒、双……