邹奇 吕珍珍 聂蔚 唐心文 杨勇 侯凤飞

【摘 要】 目的：进一步优化提高复方银杏通脉口服液质量标准，以提升产品质量的可控性，保障药品的有效性。方法：采用薄层色谱（TLC）法定性鉴别复方银杏通脉口服液中女贞子和钩藤药材；丹酚酸B和二苯乙烯苷用HPLC法测定含量。结果：薄层色谱斑点清晰，比移值较适合，阴性对照无干扰。主要特征成分丹酚酸B和二苯乙烯苷在各自线性范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为95.49%和94.84% ，RSD分别为2.12%和1.91%（n=6）。结论：多味药材定性鉴别和特征成分含量测定相结合建立的复方银杏通脉口服液质量控制方法科学合理，保证质量的可控，可为该制剂后续质量提升提供依据。

【关键词】 复方银杏通脉口服液；丹酚酸B；二苯乙烯苷

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2023）09-0039-05

Abstract：Objective To further optimize and improve the standard of Compound Yinxing Tongmai Oral Liquid， so as to improve the controllability of product quality and ensure the effectiveness of drugs.Methods TLC was used to qualitatively identify Ligustrum lucidum and Uncaria hook in Compound Yinxingtongmai Oral Liquid; salvianolic acid B and stilbene glycosides were determined by HPLC.Results The spots of TLC were clear， the ratio shift was suitable， and the negative control had no interference. The main characteristic components salvianolic acid B and stilbene glycosides had good linear relationship in their respective linear ranges，the average sample recovery rates were 95.49% and 94.84%， and the RSDs were 2.12% and 1.91%， respectively（n=6）.Conclusion The quality control method of compound Yinxing Tongmai oral liquid established by the combination of qualitative identification of multi-flavor medicinal materials and content determination of characteristic components is scientific and reasonable， which can ensure the controllability of quality， and can provide a basis for the subsequent quality improvement of the preparation.

Keywords：Compound Yinxing Tongmai Oral Liquid; Salvianolic Acid B; Dstilbene Glycoside

復方银杏通脉口服液组方含丹参、银杏叶、钩藤、女贞子、杜仲、川牛膝、制何首乌7味中药材。其功能主治为滋阴补肾，舒肝通脉。用于中老年人轻度脑动脉硬化所致的头晕头痛、耳鸣耳聋、视物模糊、记忆力减退、腰膝酸软、肢体麻木等证属肝肾阴虚者［1］。其现行标准只对银杏叶、制何首乌、丹参进行定性鉴别，对制何首乌中大黄素照薄层色谱法进行含量控制，并不能全面反映产品的质量。现研究增加女贞子和钩藤药材定性鉴别，增加丹酚酸B、二苯乙烯苷HPLC法含量测定，为复方银杏通脉口服液的质量标准提升提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 RE-52A型旋转蒸发仪（上海雅荣）；AUW-220D分析天平0.01mg（日本岛津Shimadzu）；AUY-220分析天平0.01mg（日本岛津Shimadzu）；DK-98-Ⅱ电热恒温水浴锅（天津泰斯特）；ZF-1紫外灯（巩义予华）；LC-20A高效液相色谱（日本岛津Shimadzu ）; ZWM-LS1-20纯水机（湖南中沃水务环保）；TD5A-WS离心机（湖南湘仪）；KQ-400DE数控超声波清洗器（昆山超声）。

1.2 试药 复方银杏通脉口服液均由补天药业股份有限公司生产提供。异鼠李素（110860-201611）、槲皮素（100081-201610）、山柰素（110861-201812）、二苯乙烯苷（110844-202116）、丹酚酸B（111562-201917）、齐墩果酸（110709-201808）来自中国药检院。色谱纯：乙腈、甲醇，其他为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别 钩藤：取样品50 mL，加浓氨水调PH至10～11，混匀，加等体积三氯甲烷萃取2次，回收溶剂，用甲醇2 mL溶解残渣作为供试品溶液。取钩藤对照药材2 g，加浓氨水6 mL，静置30 min，加50 mL三氯甲烷，加热回流1 h，过滤，滤液蒸干，残渣用1.5 mL甲醇溶解作为对照药材溶液［2］。制备缺钩藤的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法，吸取上述供试品，阴性对照品，对照药材溶液各10 μL点于硅胶G薄层板上，以丙酮-石油醚（60～90 ℃）（9∶11）为展开剂，展开，取出，晾干，在365 nm处观察。由图1（A）可知，样品色谱在对照药材相应位置上显相同荧光点，分离度较好，阴性无干扰。女贞子：取钩藤项下供试品作为供试品溶液，另取女贞子对照药材2 g，按中国药典女贞子鉴别项方法［2］制备对照药材溶液。取缺女贞子的样品50 mL，同供试品溶液相同制备方法制备阴性对照品溶液。另取齐墩果酸对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述供试品，阴性对照品，对照药材溶液各10 μL点于硅胶G薄层板上［2］，展开剂为甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸（12∶4∶0.5）进行展开，取出，晾干，显色剂为1%香草醛硫酸乙醇溶液，置于105 ℃至斑点显色清晰。由图1（B）可知，样品与对照药材、对照品相应位置上显相同颜色斑点，分离度较好，阴性无干扰。

2.2 二苯乙烯苷含量测定

2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（20∶80）为流动相；检测波长为320 nm［3］。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加稀乙醇制成0.2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取产品5 mL，加62%乙醇定容至25 mL，摇匀，过滤，取续滤液即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备 取缺制何首乌的阴性样品，按供试品溶液制备方法同法制备阴性对照品溶液。

2.2.5 方法学考察

2.2.5.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照品溶液10 μL，按上述色谱条件分别进样测定。结果供试品色谱中二苯乙烯苷与对照品色谱峰保留时间一致，而阴性对照品溶液色谱中则无此峰，说明阴性无干扰。结果如图2所示。

2.2.5.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液，浓度分别为0.186 mg/mL、0.0928 mg/mL、0.0464 mg/mL、0.0232 mg/mL、0.0116 mg/mL，各10 μL进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（y），进样浓度为横坐标（x），进行线性回归，线性回归方程：y=38319878.11x-85539.83（R2=0.9999，n=6）。试验结果表明，进样量在0.116～1.856 μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.5.3 精密度试验 取同一批复方银杏通脉口服液样品，按2.2.3项制备供试品溶液1份，连续进样6次结果二苯乙烯苷峰面积的RSD值为1.06%，表明仪器精密度较好。

2.2.5.4 稳定性试验 取同一批复方银杏通脉口服液，按2.2.3项制备供试品溶液1份，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、10 h、23 h进样，峰面积的RSD值为0.29%。结果显示，供试品溶液在23 h内稳定。

2.2.5.5 重复性试验 取同一样品，制备供试品溶液6份，按2.2.1色谱条件测定峰面积，并计算含量。结果二苯乙烯苷峰面积的RSD为1.27% 。表明该方法重复性好。

2.2.5.6 加样回收试验 精密量取6份已知含量的样品（批号：20210929;含量：0.286 mg/mL）1.2 mL，分别精密加入对照品溶液（0.376）1 mL，加稀乙醇定容至5 mL。混匀，按照上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，计算回收率。结果见表1。

2.3 丹酚酸B含量

2.3.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78）为流动相；柱温为20 ℃ ；流速为每分钟1.0 mL，檢测波长为286 nm［2］。

2.3.2 对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇-水（8∶2）混合液制成0.30 mg/mL的溶液，即得［2］。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密量取10 mL，加甲醇稀释至25 mL，混匀，过滤，滤液作为供试品溶液。

2.3.4 阴性样品溶液的制备 取缺丹参的阴性样品，按2.3.3制备阴性对照品溶液。

2.3.5 方法学考察

2.3.5.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照品溶液20 μL，按上述色谱条件分别进样测定。结果供试品色谱中丹酚酸B与对照品色谱峰保留时间一致，而阴性对照品溶液色谱中则无此峰，说明阴性无干扰。结果如图3所示。

2.3.5.2 线性范围试验 精密吸取对照品的溶液，浓度分别为0.045 mg/mL、0.091 mg/mL、0.105 mg/mL、0.227 mg/mL、0.378 mg/mL，各20 μL进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（y），进样浓度为横坐标（x），进行线性回归，线性回归方程：y=3E+07x - 53207。（R2=0.998，n=6）。试验结果表明，在0.90～7.56 μg进样量范围内呈良好的线性关系。

2.3.5.3 稳定性试验 取同一批复方银杏通脉口服液样品按2.3.3项配制供试品溶液1份，分别在0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、18 h进样，结果显示，供试品溶液在18 h内稳定。

2.3.5.4 精密度实验 取相同批复方银杏通脉片样品按按2.2.3.3项配制供试品溶液1份，连续进样6次，峰面积的RSD值为0.46%，表明仪器精密度良好。

2.3.5.5 重复性试验 取同一批复方银杏通脉口服液按样品含量测定方法配制供试品溶液6份，按照上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，结果丹酚酸B峰面积的RSD值为1.05%。试验结果表明，该方法重复性良好。

2.3.5.6 加样回收试验 分别精密量取6份已知含量的样品（批号：20210929;含量：0.244 mg/mL）1.6 mL，分别精密加入对照品溶液（0.4067 mg/mL）1 mL，加甲醇定容至5 mL。混匀，按照上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，计算回收率。结果见表2。

2.4 样品测定结果 取复方银杏通脉口服液3批，按各自的制备方法制成供试品溶液。按各自色谱条件测定。结果见表3。

3 讨论

复方银杏通脉口服液中钩藤的定性鉴别时显色剂选用改良碘化铋钾溶液，发现供试品的斑点颜色浅，与显色剂区别不明显，而在紫外灯下（365 nm），出现与对照色谱相应的荧光点并且比较清晰，故钩藤鉴别选用在紫外灯下（365 nm）观察。

丹参对血液以及心血管系统的作用非常显著，丹酚酸B是其主要活性成分，对心、脑等多个器官都具有保护作用，能够清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应，能抗心肌缺血再灌注损伤，保护心脏微血管内皮细胞，抗动脉粥样硬化，抗脑缺血损伤，神经保护等［5］。二苯乙烯苷是制何首乌的主要成分，研究［6-9］发现其同样在心脑血管和老年痴呆方面作用明显，可以保护神经，修复脑损伤，抑制动脉粥样硬化，防治阿尔茨海默病。因此选用丹酚酸B和二苯乙烯苷进行含量控制，对有效评价复方银杏通脉口服液的质量具有重要意义。

本研究对复方银杏通脉口服液中多味药材薄层色谱鉴别方法，以及二苯乙烯苷、丹酚酸B的定量测定方法进行研究，实验表明鉴别和含量控制方法专属性强，具有可行性，能够为今后复方银杏通脉口服液的质量标准提升提供依据。

参考文献

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（收稿日期：2022-09-05 编辑：陶希睿）

基金项目：高新技术产业科技创新引领计划（科技攻关类）（编号：2020SK2051）、科技创新与成果转化项目（编号：2019zh010602）。

作者简介：邹奇（1990—），女，汉族，本科，执业药师，研究方向为药物质量研究。E-mail：945418973@qq.com

通信作者：侯凤飞（1968—），男，汉族，硕士，研究员，研究方向为中医药、民族医药。E-mail：305332567@qq.com