任 悦 魏 骋 徐添添 沈海龙 杨 玲

（林木遗传育种国家重点实验室 东北林业大学林学院，哈尔滨 150040）

水曲柳（Fraxinus mandshurica）为木樨科（Oleaceae）落叶乔木，是我国东北重要的用材树种之一。水曲柳用合子胚作为外植体诱导获得愈伤组织的悬浮体系已初步建立，但愈伤组织随着继代次数增加，逐渐褐变并死亡［1］。目前研究中存在胚性愈伤组织可能会因长期继代而造成体细胞变异等问题，因此筛选有效的低温保存方法至关重要。

超低温保存是种质资源得以长期保存的重要技术保障，其在植物遗传材料保存中的应用非常广泛。植物胚胎是植物遗传资源延续的良好载体。经过快冻法低温保存的辐射松（Pinus radiate）合子胚子叶在组织培养中作为外植体的不定芽诱导效果与保存前无差别［2］。建立植物胚胎高效稳定的超低温保存体系可以避免在长期组织培养中出现的变异现象，维持胚胎的增殖能力和萌发能力，实现优良种质资源的长期保存［3-4］。为了全面提高胚性愈伤组织保存时间，梁雪等［5］初步建立了水曲柳胚性愈伤组织超低温保存体系，Yu 等［6］用玻璃化法使愈伤组织细胞存活率高达61.94%，用慢冻法使愈伤组织细胞存活率高达80.82%。对水曲柳优良胚性细胞系的保存迫在眉睫，而相关的超低温保存技术还需进一步优化。

参考前人对水曲柳胚性愈伤组织的研究结果，本研究使用3种冷冻方式对水曲柳合子胚进行超低温处理，以得到最适宜合子胚的冷冻方式与脱水时间。……