敖 星,候海玲

(内蒙古自治区药品检验研究院,内蒙古 呼和浩特 010020)

复方樟脑乳膏是临床中治疗湿疹、皮炎及荨麻疹的常用药物,该药物主要采取外敷用药方式[1]。不仅具有良好的止痒效果,同时其在抗炎以及抗过敏等方面也具有良好作用[2,3],在治疗一些皮肤病如神经性皮炎、瘙痒症和冻疮时效果明显,对带状疱疹和蚊虫叮咬引起的疼痛也能起到防治作用[4]。本品不含激素,安全性较高。

本品为复方制剂,由樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、苯海拉明、葡萄糖酸氯己定和甘草次酸共六种药物组成,制剂中每克的标示量依次为40mg、30mg、20mg、10mg、2mg、3mg。制剂中的辅料有甘油、羟苯乙酯、液体石蜡、白凡士林、单硬脂酸甘油脂、硬脂酸、焦亚硫酸钠、依地酸二钠、聚山梨脂-80多种成分。[5]甘草次酸作为制剂中有效成分之一,具有抗过敏和抗炎的药理作用[6-8]。本法根据复方制剂中的药物特性,摸索出对甘草次酸进行含量测定的方法,为药品质量标准的制定和提高提供技术支持。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

LC-20A型高效液相色谱仪;1260型高效液相色谱仪;Mettler AL204电子天平(百分之一)、Sartorius SA125P-1CE-DI(十万分之一)、Sartorius MAX (SG EA)(百万分之一)电子天平;Millpore 超纯水机;KQ-500型数控超声波清洗器超纯水(自制),无水乙醇(分析纯),甲醇(色谱纯)

1.2 样品

甘草次酸(C30H46O4)对照品,批号:110723-201715,纯度:99.6%,购于中国食品药品检定研究院。共收集到5家生产企业的5批样品进行试验。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Waters Atlantis T3(4.6*250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(90∶10∶0.6)为流动相,检测波长为250nm,流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量20μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取甘草次酸对照品6mg,置于50mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取本品2g,置50mL量瓶中,加入适量甲醇,于60℃水浴振摇使甘草次酸溶解,放至室温后用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性试验

按复方樟脑乳膏处方,除甘草次酸外,取辅料2g,置50mL容量瓶中,照“2.2.2”同法操作,制备专属性试验溶液,进样量设为20μL,上机分析测定,结果见图1、图2。

图1 空白溶剂

图2 专属性试验溶液

由图可见,溶剂和药用辅料在250nm的波长处没有吸收,在甘草次酸出峰时间内对样品测定不存在干扰,专属性较好。

2.3.2 线性与范围

精密称取甘草次酸对照品适量,以甲醇为溶剂制成每1mL约含甘草次酸0.12mg的溶液,分别精密量取5、10、15、20、25、30μL注入液相色谱仪,得到试验数据,再以进样量(μg)及峰面积(A)为坐标进行线性回归。甘草次酸线性方程为:Y=1677130.76x+9574.93(n=6,r=0.9999)。结果表明甘草次酸在0.6048～3.6288μg浓度范围内与其峰面积呈线性关系。结果见表1。

表1 线性考察结果

2.3.3 重复性试验

精密称取本品2g,置50mL量瓶中,按“2.2.2”项同法平行制备6份供试溶液。进样量设为20μL,上机运行并记录色谱图,代入上述回归方程后计算,得到RSD为0.7%,证明本法的重复性较好。

2.3.4 精密度试验

取“2.3.3”项下供试品溶液1份,测定6次,RSD为0.12%,结果说明本法有良好的仪器精密度。

2.3.5 稳定性溶液

按“2.2.2”项下方法制备1份供试品,在0、2、4、6h分析测定,6小时内峰面积RSD为0.21%,说明供试品溶液在6小时内仍比较稳定。

2.3.6 回收率试验

取除甘草次酸外的阴性样品2g,精密称定,置50mL量瓶中,按下表加入对照品,再按“2.2.2”项下方法,得供试品溶液。进样量设为20μL,将所得数据代入方程后计算,结果显示,低、中、高三个浓度回收率在97.12%～101.26%,平均回收率为99.8%,9份回收率RSD为1.4%,表明该方法准确度良好,结果见表2。

表2 回收率试验结果

2.3.7 耐用性试验

按“2.2.2”项下方法,制得供试品溶液。分别对流速(0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min)、柱温(30℃、35℃、40℃)、色谱柱(Waters Atlantis T35μm 4.6*250mm、CAPCELL PAK MGⅡC185μm 4.6*250mm)、仪器(岛津LC-2010、Angilent1260)进行耐用性试验考察,结果显示各峰理论塔板数、拖尾因子及分离度均能达到检测条件,说明本法有良好的耐用性。

3 样品测定

取5个厂家的5批样品,按“供试品溶液制备”同法操作,制备供试品溶液。进样量设为20μL,将所得数据代入回归方程后计算,结果见表3。

表3 样品信息

4 讨论

4.1 流动相条件的选择

参考各企业注册标准,分别对甲醇-水-三乙胺(94:6:0.1)(用磷酸调pH值至3.0)、甲醇-水-冰醋酸(85∶15∶0.6)、甲醇-水-冰醋酸(90∶10∶0.6)进行了考察(此实验选用资生堂CAPCALL PAK MGⅡ 5μm 4.6*250mm色谱柱),三种流动相对甘草次酸的分离效果都不错,考虑到节约试验时间及简化流动相配制方法,选用甲醇-水-冰醋酸(90∶10∶0.6)作为流动相。

4.2 提取溶剂的选择

参考各企业注册标准,综合考虑,分别对甲醇、无水乙醇进行考察,发现甲醇提取的样品峰形更好,理论塔板数更高,因此选择甲醇作为提取溶剂。

4.3 提取方式的选择

对超声和直接振摇进行了考察,发现,直接超声提取效率较低,需加热超声,加热超声温度达到40℃时,大部分企业的样品能够分散均匀,目标成分容易提取出来,但个别企业的乳膏剂比较黏腻,无法充分分散,导致提取不完全,且提取不容易平行,因此选择直接加热振摇。再由各家工艺可知,甘草次酸是在乳化后冷却至60℃时加入并开启均质器及搅拌均匀,而且60℃时乳膏分散比较均匀,因此,选择60℃进行振摇提取。