黎 燕，孙志刚，陈利红，周 红

（1.上海理工大学，上海 200093；2.宁夏启元国药有限公司，银川 750011）

金莲清热颗粒为《中国药典》（2020年版一部）收载品种[1]，由金莲花、大青叶、石膏、知母、地黄、玄参、苦杏仁（炒）七味中药组成，其中金莲花是该产品的君药之一，主要有效成分为黄酮类和生物碱类物质[2-3]。其中牡荆苷为主要的黄酮类物质，是金莲清热颗粒的有效成分之一[4-5]。《中国药典》将牡荆苷含量作为金莲清热颗粒的质控标准，规定1 g金莲清热颗粒中牡荆苷（C21H20O10）含量不得少于0.32 mg[1]。本研究按照《中国药典》标准方法，检测金莲清热颗粒中牡荆苷的含量，并在此基础上，通过体外酶学实验，探索金莲清热颗粒抑制冠状病毒蛋白酶活性效果。

1 材料和方法

1.1 仪器及试剂

主要仪器：酶标仪（型号：SpectraMax M2e，Molecular Devices公司）；LC-15C高效液相色谱仪（岛津公司）；KQ5200B型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；METTLER TOLEDO ME55电子天平（METTLER TOLEDO公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（上海皓昕机电设备有限公司）。主要试剂：Tris base（Sigma7-9）、EDTA、NaCl、TCEP、BSA等。乙腈、乙酸铵为色谱纯，正丁醇、乙酸乙酯、甲醇、氯仿均为分析纯。

1.2 实验材料

1.2.1 受试样品和对照化合物1）受试样品金莲清热颗粒：由宁夏启元国药有限公司提供（样品编号：USST-LY-Y2020-1），牡荆苷的含量测定选取3个批次样品（200420-1、200420-2、200420-3）。体外酶学实验样品批号：200420-1。配制方法：受试样品在实验当天使用无菌水溶解到800 mg·mL-1，经100℃水浴加热10 min，冷却至室温后取上清液用于测试。2）对照化合物：3CLpro抑制剂（GC376），来源：TargetMol（批号：T5188-1），贮存条件：-80℃。配制方法：对照化合物用100%二甲基亚砜（DMSO）配制成100 mmol·L-1的母液，分装后冷冻保存于-80℃。

1.2.2 主要蛋白酶（main protease，Mpro） 蛋白Mpro（NC_045512）蛋白酶蛋白（批次号：RP200 225A）由上海药明康德新药开发有限公司克隆表达。……