张得芳，于 倩，史文君

（青海大学农林科学院，西宁 810016）

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）是在PCR反应体系中加入荧光集团（带有荧光标记的特异性探针等），并利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，再通过标准曲线对DNA模板进行定量分析的方法，常用于检测基因表达谱、基因表达量分析、转录组结果验证分析等方面[1]，是一种应用广泛、灵敏度高[2]的分析方法。在qRT-PCR的分析过程中，多种因素如RNA和cDNA的浓度纯度[3]、各阶段的反应条件等都会对分析结果产生影响[4]，选择表达稳定的内参基因可对荧光定量PCR反应进行准确校正，从而减小数据误差[5]，不恰当的内参基因会导致表达谱的偏移从而影响分析结果的准确性[6]，因此选择合适的内参基因对试验结果的准确性至关重要。

内参基因是在基因表达过程中不受温度等外部条件影响且在不同样品中均稳定表达的参照基因[7]，利用这个基因的表达水平可以准确量化初始材料的载量。管家基因在所有细胞中均有表达，且表达水平受环境因素影响较小，因此在进行基因表达水平的研究时常用其作为内参基因进行试验。常见的管家基因有：肌动蛋白基因（ACT/Actin）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（GAPDH）、转录延伸因子基因（EF1α）、多聚泛素酶基因（UBI/UBQ）、18S核糖体RNA（18S）、β2-微球蛋白基因（B2M）和亲环蛋白基因（CYP）等[8]。现有的研究表明，在所有组织、发育时期、生理条件下均稳定表达的理想内参基因并不存在，所以其表达的稳定性是相对的，需要研究者根据自己的样品类型及试验条件来选择合适的内参基因。……