严关平，刘武林，何廷德，雷 余，刘 洋，龚 倬，谢家宁

1.重庆市涪陵区妇幼保健院检验科，重庆408000；2.重庆市涪陵区妇幼保健院妇产科，重庆 408000；3.重庆市中医院检验科/重庆市中医感染性疾病中西医结合诊治实验室，重庆 400021

珠蛋白生成障碍性贫血(原名地中海贫血，简称地贫)是由于一组珠蛋白基因突变或缺失导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血的单基因遗传性疾病，也是危害最严重的血红蛋白病。全球有近7%的人口为地贫基因携带者，每年有30万～50万患地贫和镰刀细胞贫血的新生儿出生[1]。目前，医学对重型地贫尚无有效治疗方案，只有通过孕前遗传检测、B超检查、孕期筛查和产前诊断，可使出生缺陷率减少40%～50%。本研究对2020年1月至2022年3月就诊于重庆市涪陵区妇幼保健院的5 195例孕妇血液学表型[红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)]等进行检测，结合碱性Hb电泳对Hb成分进行分析，然后采用单管多重聚合酶链反应法(GSPCR)结合反向斑点膜条杂交技术(RDB)进行地贫基因检查和基因诊断，就Hb成分分析结果和地贫基因分型结果进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 对2020年1月至2022年3月到重庆市涪陵区妇幼保健院接受孕早期检查的5 195例孕妇进行地贫基因筛查。5 195例孕妇年龄19～47岁，平均(25.1±4.32岁)，孕周6～15周，平均(12.5±2.18)周，均签署了知情同意书。

1.2仪器与试剂 SYSmex ltd XN-1000(B3)型全自动血液细胞分析仪由希森美康医用电子有限公司提供，HBNP-480型全自动核酸提取仪由广东凯普生物科技有限公司提供，HBHM-3000S型自动核酸分子杂交仪由广东凯普生物科技有限公司提供，7500型实时荧光定量PCR扩增仪由美国ABI提供。地贫Hb成分分析采用Helena SPIFE 3000全自动电泳分析系统及试剂，α、β-地贫基因检测试剂盒由广州凯普医药科技有限公司提供。

1.3方法

1.3.1电泳及基因检测 采用碱性Hb电泳检测HbA2、Hb(A+F)，结合外周血的RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC进行Hb成分及异常Hb带检测，采用GSPCR结合RDB技术(即PCR+导流杂交法)进行α、β-地贫基因检测。各项实验及结果判断均按照试剂盒说明书进行。

1.3.2地贫基因筛查诊断标准 (1)MCV检测结果异常标准：<80 fL或>100 fL。MCH检测结果异常标准：<27 pg。(2)碱性Hb电泳时，HbA2<2.5%行α-地贫基因分析，HbA>3.5%行β-地贫基因分析。

1.4数据处理 采用描述性的方法对数据进行分析，并对地贫基因筛查结果及基因型别分布情况进行描述。

2 结 果

2.1地贫基因筛查结果 5 195例受检孕妇中， MCV检测结果异常2 077例(其中MCV<80 fL为803例，MCV>100 fL为1 274例)， MCH检测结果异常(<27 pg)为1 008例，Hb检测结果异常为384例。

2.2碱性Hb电泳结果 Hb(A+F)碱性电泳实验结果：阳性307例，其中HbF降低102例，为β-地贫可疑，可疑阳性率为1.96%(102/5 195)；HbA2降低205例，为α-地贫可疑，可疑阳性率为3.95%(205/5 195)。Hb成分电泳分析结果正常4 888例，正常率为94.09% (4 888/5 195)。5 195例受检孕妇未检测到异常Hb带。

2.3地贫基因检测结果 5 195例孕妇确诊为地贫基因携带者(包括α-地贫基因缺失型和突变型及β-地贫基因突变型)300例，阳性率5.78%(300/5 195)，其中α-地贫基因携带者198例，阳性率3.82%，β-地贫基因携带者102例，阳性率1.96%。

2.3.1α-地贫基因缺失型 α-地贫基因缺失型杂合子179例，未检出α-地贫基因缺失型纯合子。见表1。

表1 α-地贫基因缺失检测结果

2.3.2α-地贫基因突变型 检出α-地贫基因突变型杂合子19例，未检出α-地贫基因突变型纯合子。见表2。

表2 α-地贫基因突变检测结果

2.3.3β-地贫基因突变型 β-地贫基因突变型杂合子102例，未检出β-地贫基因突变型纯合子。检测结果见表3。

表3 β-地贫基因突变检测结果

3 讨 论

地贫的发病机制为编码珠蛋白的基因缺失、突变或调控异常使肽链出现一种或几种合成障碍，导致Hb组分发生常改变的常染色体隐性遗传病，呈进行性贫血[2]。地贫患者遍布全球，主要高发于地中海周边国家及亚洲、南太平洋、中美洲等地区。据我国的流行病学调查：长江以南(广西、广东、海南、台湾、香港、四川、重庆、云南、贵州)为地贫的多见地区。地贫在临床上根据基因不同的表现类型，划分为α-地贫、β-地贫、异常Hb病等。地贫具有一定致残性和致死性，因可导致出生缺陷或死亡而备受人们的重视[3]。若夫妻为同型地贫基因的携带者，每次妊娠，其子女有1/4的概率为重型地贫患儿。

重庆由于历史原因，多由湖广移民迁入，有着复杂的遗传基因背景，而广西、广东地区是地贫的主要高发地，余永熊等[4]报道显示，广西地贫基因携带率高达24.78%，因此从地域迁徙因素上来推断重庆存在很高的地贫基因阳性率。本研究对5 195例孕早期检查孕妇进行地贫基因筛查，结果显示， MCV检测结果异常的2 077例， 通过血清铁蛋白测定，排除缺铁性贫血；MCH检测结果异常(<27 pg)的1 008例；碱性Hb电泳结果异常的307例，其中有102例HbF降低(为β-地贫可疑)，有205例HbA2降低(为α-地贫可疑)。对MCV结果异常者进行地贫基因检测，检出300例阳性，地贫基因检出率为14.44%(300/2 077)。 这与谢建渝等[5]报道的重庆孕妇地贫基因阳性率(14.14%)和杜伟等[6]报道的重庆地贫基因阳性率(13.92%)基本一致。

本研究采用GSPCR技术结合RDB 法同时进行α、β-地贫基因检测，数据统计结果显示:在5 195例孕妇早期地贫基因检测中，α-地贫基因缺失型、突变型及β-地贫基因突变型共阳性300例，阳性率5.78%(300/5 195)。地贫基因检出率高于全国2.64%的平均水平[7]，略高于谢建渝等[5]报道的重庆地区孕妇地贫筛查的阳性率(4.25%)，这可能与孕妇所在地域等不同有关。基因检测确诊的300例孕妇中，孕妇α-地贫基因携带者有198例(α-地贫基因缺失型有179例，α-地贫基因突变型有19例)，β-地贫基因突变有102例。198例α-地贫基因携带者中最高的基因型是-α3.7/αα，其次是东南亚缺失型--SEA/αα，再次是-α4.2/αα基因型，第四位是αCSα/αα基因型，最后是αWSα/αα基因突变型。在102例β-地贫基因突变型携带者中，检测出9种常见的地贫等位基因，以CD17型最多，其次是CD41-42型，再次是IVS-Ⅱ-654型。

从本研究数据得出，α-地贫基因携带者以-α3.7/αα基因型为常见，β-地贫基因突变型携带者CD17型最多。与国内的相关报道基本相同[8]，α-地贫基因和β-地贫基因突变型的型别种类及频率分布与我国南方地区基本一致[9]。有研究提示，α-地贫与低出生体重等明显相关[10]。这说明在孕妇的产前检查中要高度重视并加强孕早期的地贫的检测与筛查。在300例孕妇地贫基因携带者中，α-地贫基因阳性率明显高于β-地贫基因，与地贫高发区的广东[11]、广西[12]相关报道基本吻合。

本研究数据说明：重庆市涪陵区孕妇有较高的地贫基因阳性率和地贫基因筛查阳性率。该地区α-地贫基因携带者以-α3.7/αα基因位点和--SEA/αα基因位点为常见，β-地贫基因突变型携带者以CD17型基因位点多见。近期的研究报道显示，我国地贫患儿的出生率是2.4‰[13]。因此，及早行地贫基因筛查及基因分析，对地贫基因携带的孕妇进行出生缺陷的干预，有助于防控重度地贫新生儿的出生，这对提高人口素质具有重要意义。