邢长亮

（河北省秦皇岛市青龙满族自治县农业农村局基层动物防疫监督站，河北 秦皇岛 066599）

目前，国内外牧场奶牛的人工配种主要是人工授精技术。将细管冻精贮存于液氮罐中，对确定发情奶牛经解冻后装入输精枪，采用直肠把握法进行人工输精。在实际生产中，受准确率或经济、设备条件的制约，直肠检查结合外观诊断仍被广泛应用。超声波诊断法因其昂贵的使用价格，使用并不广泛。

1 冷冻精液的保存

冷冻精液贮存于盛有液氮的容器（液氮罐）中。液氮是一种无色透明的液体，温度为-196℃。液氮罐多以不锈钢或铝合金制成，液氮罐的容量常用的为10L、30L；罐内有提筒多个，可分别存放不同公牛的精液，并作好标记和数量的记载。一个10L的液氮罐添足一次液氮约可维持15d左右，当液氮容量达1/3时就要及时补充。测定液氮容量可用木标尺或称重法。液氮罐要专人管理，存放室要清洁干燥，通风良好。液氮罐内不同部位温度不相同，管颈处的温度为-100～-150℃，管颈上温度更高，故取精时不要把提筒提出颈口，动作要迅速，取毕后迅速把提筒浸没于液氮中。

2 精液的解冻

将常用的0.25mL细管精液从液氮罐中取出后，立即投入35～40℃温水中，约经10s取出；也可直接用手搓细管使冻精液融化，然后把封闭的一侧用经干燥消毒的剪刀剪去，放入输精枪里备用。解冻后的精液要尽快使用，以免温度升高，缩短精子寿命。

3 精子的检查

对每批解冻精液都应作抽样检查，检查项目有活力、密度、顶体完整率、畸形精子率和微生物指标是否符合国家标准（GB 4131-84）中规定的活力≥0.30，每一剂量（细管）直线运动精子数≥1000万个，顶体完整率≥40%，畸形精子率≤20%，非病原细菌数≤1000个/mL。

4 输精

4.1 输精前的准备工作（1）母畜的准备：母牛作适当的保定，尾巴系于一侧，除去外阴部污垢，并用温水洗清，用消毒布擦干。（2）输精器械的准备：输精枪经清洗、干燥、消毒后备用。（3）术者的准备：输精员要剪短、磨平指甲，手戴经充分洗涤消毒后涂上润滑剂的长臂乳胶手套。

4.2 直肠把握式输精法施术要领与步骤（1）术者将一只手伸进直肠内，掏去积存的粪便。（2）检查卵泡成熟情况及在哪一侧卵巢上的位置。（3）抓住子宫颈。（4）另一只手持干净毛巾擦净沾于阴门处的牛粪。（5）持已装好细管精液的输精枪插入阴道至子宫颈口，把握子宫颈的手与持输精枪的手协同操作，把输精枪导入子宫颈深部或子宫体；在技术熟练的条件下，可导入至排卵侧的子宫角膨大部。（6）慢慢注入精液，注毕，缓慢取出输精枪。（7）施术手法要轻柔、循序，防止因动作粗暴损伤生殖道黏膜，造成后患。（8）输精毕，作好发情、直肠检查和配种的详细记录。

5 妊娠

受精后的3～5d到达子宫角，此时受精卵已分裂到16～32细胞（桑葚期）；胚胎在子宫内浮游，继续发育，在20～30d开始疏松附植在子宫内膜（也称“着床”），形成胎膜，到60d附植牢固。早期胚胎死亡率很高，大多发生在胚胎“着床”阶段。据报道，经产牛在受精的28～32d后“着床”率为40%～47%，育成牛接近75%。早期死亡的胚胎被吸收而未发觉，往往误认为未受孕。造成早期胚胎死亡的原因很多，如遗传因素、内分泌失调、子宫内环境不良、外界刺激、粗暴的直肠检查、母畜的疾病等。

6 妊娠诊断

6.1 妊娠征兆母牛妊娠后周期性发情停止，举止变得谨慎安稳，食欲增进，新陈代谢旺盛，营养状况改善，阴门紧收，阴道黏膜苍白，有少量厚稠的黏液流出，或黏附于阴毛上。随着妊娠天数的增加，腹围逐渐增大。初孕牛妊娠3个月后，乳房开始渐渐发育变大。

6.2 直肠检查主要检查子宫、卵巢、子宫中动脉等。注意子宫角位置、两侧子宫角大小的对比、质感、胎膜、子叶；卵巢上黄体生长情况；两侧子宫中动脉粗细的对比、脉搏的强弱及血流的震颤感等。以上这些指征并不是一成不变的，尤其是经产牛，也常因检查者缺乏经验，影响判断。妊娠诊断不要凭个别指征轻率下结论，要综合考虑，在一时不能确诊的情况下，可应用其他诊断手段来证实，或间隔20～30d作复查。如在配种后30d左右作第一次妊娠诊断为孕牛，最好在配种后50～60d作第二次检查确诊，以区别胚胎是否早期死亡，然后在干乳前再作一次检查。直肠检查要注意子宫积液、子宫脓肿、子宫肿瘤等与妊娠子宫的区别及妊娠黄体与持久黄体、囊肿黄体的区别。作直肠检查者还要注意动作不要粗暴，以免人为损伤胚胎或妊娠黄体，引起流产或损伤直肠黏膜。

6.3 超声波诊断超声波诊断可分超声示波（A型）诊断法、超声显像（B型）诊断法、超声光点扫描（M型）诊断法和超声多普勒（D型）诊断法。超声多普勒（D型）诊断法系应用物理学上的多普勒效应原理，经仪器测出多普勒信号或D型声像图。对妊娠50d左右探测胎儿血管、心脏和脐带中血液的流动情况进行妊娠诊断。新一代的超声扫描影像仪作早孕诊断，据介绍在配种后25～30d，准确率可达98%～100%；配种后40d，通过对胚胎的活动和心跳，可确认胚胎的存活性；配种后60～70d，可判断胚胎的性别，还可作双胎等其他潜在用途。超声波诊断法应用前景广阔，但制约其推广使用的主因是目前价格昂贵。