胡 贺，陈 鹏，万 兵，袁 化

(1.江苏福润德科技有限公司，江苏 南京 210036；2.南京农业大学，江苏 南京 210036；3.大连海洋大学，辽宁 大连 116023)

黄金鲫(Carassiusauratus)是我国传统淡水养殖鱼类鲤、鲫的杂交品种。该杂交组合具有杂交鲤鲫最好的杂种优势，生长速度超快(是普通鲫的2～3倍)、适应性强、食性杂、抗病力强、饲料转化率高、含肉率高、营养价值丰富，是农业农村部向全国推广养殖的淡水鱼类品种。

蛋白质在体内代谢的最终分解产物是小肽和氨基酸，营养小肽能以完整形式直接被机体吸收[1]，具有提高养殖动物饵料转化率，促进养殖动物生长，提高生产性能等作用[2-5]。

试验选择江苏省东台市弶港镇养殖区，以养殖黄金鲫为试验动物。在基础饲料中添加营养小肽，经投喂养殖128 d后，随机抽样检测血清生化指标、肠(前肠)和肝组织。通过观察添加营养小肽后黄金鲫血清生化指标的变化，以及肠和肝组织的组织结构，探讨营养小肽作为饲料添加剂对养殖黄金鲫健康的影响，为营养小肽在水产养殖中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 基础饲料和营养小肽

基础饲料为混养鱼配合饲料，产品标准Q/320924 YCHD 001-2021。产品成分分析执行标准为GB/T 18823，粗蛋白≥28.0%，粗脂肪≥2.5%，赖氨酸≥1.35%，水分≤12.2%，粗纤维≤11.5%，粗灰分≤15.0%，总磷≥0.7%。

营养小肽为江苏福润德科技有限公司产品，商品名为天乐泰(SBP)。该产品以豆科植物为原料，选用四联菌分阶段式密闭深层发酵，通过生物发酵和物理处理等工艺消除抗营养因子,同时保留丰富的不饱和脂肪酸，并充分分解释放不同肽段，为营养小肽类产品。产品部份检测指标为：粗纤维0.9%，粗脂肪1.5%，粗蛋白4.32%，酸溶蛋白(占总蛋白)33.5%，水苏糖和棉子糖均未检出，活菌数：乳杆菌22.6×107CFU/g、酵母1.02×107CFU/g、芽孢杆菌105CFU/g，pH值 3.5。

1.2 试验鱼养殖与管理

试验在江苏省东台市弶港镇养殖区进行，设2个试验组和1个对照组。在苗种放养7 d后，对照组投喂基础饲料，试验组投喂添加营养小肽(天乐泰)的饲料。鱼种放养时的平均体重50 g/尾。

试验组营养小肽(天乐泰)添加量为基础饲料重量的2.0%。每天投喂前用自来水将天乐泰溶解，充分混合后，在基础饲料中均匀喷洒，待表面干燥后投喂。投饲量均按鱼体重2.0%～3.0%计算。每天投喂4次，投喂时间为7:00、10:00、13:30和16:30。养殖期间水温26～33 ℃，溶氧控制在3.5～8.3 mg/L，pH值8.5～8.8。

投饲养殖128 d后，试验组和对照组随机取样黄金鲫10尾，进行体重、体长和体高检测，观察黄金鲫的生长情况。

1.3 血清制备

试验组和对照组随机取样黄金鲫各5尾，一次性注射器尾静脉取血(无抗凝剂)，4 ℃静置24 h后，2 500 r/min，-5 ℃离心5 min，取上层血清，-20 ℃保存，备用。

生化检测仪为罗氏cobas C311全自动生化分析仪。检测指标为总蛋白(TP2)、白蛋白(ALB2)、碱性磷酸酶(ALP2L)、脂肪酶(LIPC)、血糖(GLUC3)和尿素氮(U-BUN)。

1.4 组织学观察

试验组和对照组随机取样黄金鲫各5尾，进行解剖观察，分别取前肠和肝组织。前肠以肠道开口处为起点至第一个回折处之间的部分，切取0.5～1.0 cm组织。肝组织取肝脏中间部分，修切0.5×0.5 cm组织。纯净水冲洗，浸泡4.0%甲醛溶液，固定24 h后，更换甲醛溶液(4.0%)，备用。

组织切片采用美国赛默飞公司全自动组织脱水机(Excelsior AS)，染色机(Gemini AS)，包埋机(Histo STAS)和切片机(HM 325)完成。切片厚度4～5 μm，HE染色，中性树胶封片，Olympus光学显微镜观察，显微照片记录。

1.5 数据统计分析

试验数据以Excel整理，平均值±标准差(Means±SD)表示。采用GraphPad prisn 8.0软件进行方差分析和多因素比较分析，P≤0.01差异极显著，0.01

2 结果

2.1 黄金鲫生长情况

在基础饲料中添加2.0%天乐泰，经128 d养殖，试验组体重大于对照组(0.01

表1 添加营养小肽养殖128黄金鲫生长情况 (n=10)

2.2 血清生化指标

在基础饲料中添加营养小肽(天乐泰)投喂黄金鲫128 d后，试验组间血清总蛋白无显著差异(P≥0.05)，试验Ⅰ组与对照组差异极显著(P≤0.01), 试验Ⅱ组与对照组无显著差异(P≥0.05)；试验Ⅰ组血清白蛋白与对照组差异极显著(P≤0.01)，试验Ⅱ组与对照组无显著差异(P≥0.05)；试验组与对照组、试验组间血清碱性磷酸酶、脂肪酶和尿素氮均无显著差异(P≥ 0.05)；试验组与对照组间血清血糖有极显著差异(P≤0.01)，试验组间无显著差异(P≥0.05)。见表2。

表2 营养小肽对黄金鲫血液生化指标的影响 (n=5)

2.3 肠组织结构观察

解剖观察：肠道紧连食道之后，管径逐渐变细，前、中、后肠分界不明显，呈粉色。

组织结构观察：试验组前肠组织各层显示清晰，由内向外依次为黏膜层(A)、黏膜下层(B)、肌层(C)和浆膜层(D)。黏膜层是消化管的最内层，有许多向肠腔凸出的肠绒毛组成，肠绒毛结构清晰，绒毛层非常丰厚。肌层有内层环肌(F)和外层纵肌(E)两层平滑肌组成。肠的外表均覆一层浆膜。试验组两层平滑肌结构排列紧密，内层环形肌层较为发达，外层纵行肌层则比较薄。黏膜下层与肌层之间的基底层(H)结构清晰，明显较厚且致密(见封三图1a)。黏膜层的上皮层有单层柱状上皮细胞(M)构成，其间散布少量杯状细胞(N)，上皮层下的固有层(L)清晰可见(见封三图1b)。

对照组内环肌(f)和外纵肌(e)结构排列疏松，黏膜下层与肌层之间的基膜结构不清晰(h)，固有层和黏膜下层细胞成分增多(b)(见封三图1c)。

2.4 肝组织结构观察

肝脏形态观察：肝脏大小形态正常，呈鲜亮的暗红色，紧贴肠系膜上，胰腺弥散性地分布在肝脏组织中，胆囊与肝脏相连。

组织结构观察显示：肝组织结构较清晰，肝细胞形状较规则(A)，呈略带圆形的多角形，细胞核1个，核仁清晰，位于细胞中间，细胞界限分明，细胞质HE红染。肝细胞围绕中央静脉(C)呈放射状排列，成串形成肝索样结构，肝细胞间可见肝血窦(B)，中央静脉和血窦中可见血细胞(见封三图2)。

3 讨论

3.1 营养小肽对黄金鲫血清生化指的影响

鱼类的血液与机体代谢、营养状况和疾病有着密切的关系，是重要的生理、病理和营养评价的指标[6]。血清指标与营养状况密切相关，不仅反映鱼类的生理代谢状态，还可以阐明营养对机体代谢变化的作用机制。血清总蛋白是反映动物的营养水平和动物对蛋白质的消化程度，以及鱼的健康状况的指标[6-7]。血清白蛋白是由肝实质细胞合成，具有维持血浆渗透压和pH的平衡，作为转运蛋白调节被运输物质的生理作用。当营养状况良好时，血清蛋白维持在较高的水平。检测数据分析，血清总蛋白含量试验组为(28.26±1.37)g/L和(25.54±3.41)g/L，对照组(25.20±0.92)g/L，均低于硬骨鱼类血清总蛋白含量30～50 g/L范围[6]。由于黄金鲫生长速度高于普通鲫2～3倍，基础饲料28%的粗蛋白和营养小肽(天乐泰)2%的添加量，没有满足35%饲料蛋白的需求量[8]。营养小肽(天乐泰)作为饲料添加剂，对于不同的基础饲料和养殖鱼类的添加量还有待深入研究。

血清碱性磷酸酶主要来源于肝脏、肠道和骨骼等组织，是动物生长和生存的重要调控酶，其活性在一定程度上反映了动物的生长速度[9-10]。试验组血清碱性磷酸酶均低于对照组，结合黄金鲫形体指标检测结果(表1)，试验Ⅰ组与罗莉等[10]碱性磷酸酶活性与动物的生长呈正相关理论相符合，而试验Ⅱ组与之相反。试验组间的差异是否与取样有关，还有待继续跟综检测。

鱼类的肝胰腺是生成脂肪酶的主要器官。脂肪酶的活性与饵料中的脂肪含量呈正相关[11-13]。脂肪含量高的食物会增加脂肪酶活性，而摄食脂肪含量低的食物，则脂肪酶的活性也随之降低。试验组血清脂肪酶平均值略高于与对照组，多重比较无显著差异(P≥0.05)，反映了黄金鲫的脂质代谢状况良好，处于健康水平。

血糖是反映糖代谢和机体组织细胞功能状态的重要指标，同时也反映饵料和营养的合理性[14]。在基础饲料中添加2%营养小肽(天乐泰)后，试验组血糖值均高于对照组，多重比较显示，试验组间无显著差异(P≥ 0.05)，试验组与对照组比较均有极显著差异(P≤0.01)。分析认为，低蛋白的饲料中碳水化合物的比例相对较高，养殖动物为摄食足量的蛋白质而加大摄食量，间接增加了碳水化合物的摄入量，导致血糖水平的升高[15-16]。

血清中尿素氮水平反映了肝脏和肾脏功能，以及体内蛋白质分解和沉积情况[17-18]。试验结果显示试验组血清尿素氮平均值均低对照组。试验结果与小肽可以减少尿素在肾脏中的沉积，提高动物机体蛋白质的沉积率的研究结果一致[19]。营养小肽(天乐泰)促进了氨基酸的吸收，提高了蛋白质沉积率作用。

3.2 营养小肽对黄金鲫肠组织的影响

黄金鲫摄食添加营养小肽(天乐泰)饲料128 d后，在一定程度上对黄金鲫的肠道结构产生了影响。试验组两层平滑肌结构排列紧密，对照组内环肌和外纵肌结构排列疏松。环肌的波状收缩形成肠的蠕动，纵肌的舒缩形成肠的摆动。因此，试验组前肠的肠壁收缩力强，有助于食物的混匀和运输。试验组黏膜层的上皮层单层柱状上皮细胞丰富，其间散布杯状细胞。对照组单层柱状上皮细胞排列紧密，杯状细胞极少。杯状细胞能分泌黏液和消化酶，柱状上皮细胞具有吸收作用，黏膜褶的增多，表现出较大吸收面积，有助于食物的消化和营养物质的吸收。黏膜下层由疏松结缔组织构成，是肠黏膜的支柱，同时有利于肠壁相应的扩张，将营养物质由此输入血液并到达全身。试验组黏膜下层与肌层之间的基底层结构清晰，且致密。对照组黏膜下层与肌层之间的基膜结构不清晰，固有层和黏膜下层细胞成分增多，有待于扩大样本的检测量，进一步研究探讨。

3.3 营养小肽对黄金鲫肝胰腺组织的影响

试验组黄金鲫肝脏表面被浆膜，大小形态正常，呈鲜亮的暗红色。试验组肝胰腺组织结构较清晰，密集形成网状，肝细胞呈略圆形的多角形，细胞界限分明。细胞核1个，核仁清晰，位于细胞中间。细胞质丰富，HE红染。肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，成串形成肝索样结构，每2～3层肝细胞间可见肝血窦，中央静脉和血窦中可见血细胞。在饲料中添加营养小肽(天乐泰)有助于养殖黄金鲫营养的吸收，健康状态良好。

通过对黄金鲫血清生化指标、肠和肝组织病理观察。在基础饲料中添加2%营养小肽(天乐泰)，有助于食物的消化，促进了氨基酸的吸收，提高了蛋白质的合成，反映出黄金鲫良好营养状况和健康水平。营养小肽(天乐泰)作为养殖鱼类饲料添加剂，具有良好的促生长效果，无残留，无抗药性和无污染的优势，是作为绿色饲料添加剂的首选。