李晓霞

（滨州市中心医院结核科 山东 滨州 251700）

结核病是目前重点控制的传染疾病之一，是全球需要面对的重要公共卫生问题。结核分枝杆菌（mycobac teriumtu berculosis, MTB）是引起肺结核主要致病菌，MTB 细胞壁结构较为特殊，具有较强的耐药性，能抵抗多种药物，疾病治疗时间长，易增加患者的治疗负担；且该病若未能得到有效诊治，会侵犯机体全身器官，严重危害患者的身体健康以及生命安全[1-2]。因此需要加强对结核病的积极防治，一旦发现该疾病，尽早隔离并接受针对性治疗能够帮助患者远离疾病痛苦。当前，痰培养、涂片法、分子生物学等检测方法原理各不相同，其检查结果也存在一定差异性[3-4]。细菌学检查是发现传染源的主要途径和手段，其中涂片法与痰培养是既往常用的检测方式，能够发现病原菌活动特点，且操作简单、易行，但培养耗时较长，且影响因素较多，再加上部分患者症状并不具有典型性特点，影像学表现特征不足，因此部分患者难以获得早期确诊，甚至还会有误诊、漏诊情况发生，影响患者后续治疗[5-6]。聚合酶联反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术的应用为MTB 细菌学检查提供了特异、敏感、简单的检查方法，能够检测到结核分枝杆菌脱氧核糖核酸，有利于疾病进一步确诊[7]。本文旨在对比涂片检测方法与实时荧光定量PCR 法（GeneXpert MTB/RIF）检测MTB 和对结核的诊断效果，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年1 月—12 月滨州市中心医院结核科三病区住院肺结核患者144 例，非结核患者41 例。结核患者中，男性106 例，女性38 例；年龄14 ～82 岁，平均年龄（53.26±10.32）岁。非结核患者中，男性31 例，女性10 例；年龄16 ～78 岁，平均年龄（51.67±9.06）岁；疾病类型：肺炎26 例，肺癌2 例，结节病4 例，哮喘3 例，肺泡蛋白沉积症1 例，间质性肺病1 例，非结核分枝杆菌病1 例，支气管扩张并感染3 例。符合《赫尔辛基宣言》要求。

纳入标准：①肺结核患者应符合《肺结核诊断标准》（WS-288-2008），且存在咳嗽、咯血、盗汗等一系列表现症状；非结核患者不符结核诊断校准且不存在上述症状。②入院后完善个人信息电子档案建立，病史资料完整；③患者无严重心脑血管疾病。排除标准：①病史资料不全者；②不配合检测者。

1.2 方法

所有患者均在早中晚漱口后，在医护人员指导下深咳，并将痰液装入一次性痰液杯中，加盖送检。（1）涂片检测法：用竹签蘸取少量脓样痰液标本，将其涂抹于载玻片右侧中央位置，于自然环境中晾干，并进行加热固定，行抗酸染色镜检。将石碳酸复红染色液滴于载玻片上，盖满玻片后用微火固定，观察到有蒸汽出现后停止，保持5 min，用蒸馏水进行水洗；用酸性酒精脱色1 min，流水自玻片一端轻缓冲洗，如脱色不彻底，可重复一次；滴加亚甲蓝复染液，染色30 s，沥去复染液，冲洗玻片，沥水，将染色后的玻片置于玻片架上，自然晾干；滴加镜油镜检观察。（2）实时荧光定量PCR 法检测：取2 ～4 mL 标本，加入2 ～3 倍样本体积的消化液溶液液化振荡20 次左右，静置液化30 min 后，取2 mL样本置入PCR 反应管，放入实时荧光定量PCR 仪器（美国Cepheid 公司生产）进入检测，约2 h 后查看结果。

1.3 阳性结果判定及观察指标

（1）检验阳性结果判定：涂片检验阳性结果判定：以显微镜下100 个视野中发现≥3 条抗酸杆菌为阳性，未观察到或＜3 条抗酸杆菌为阴性；实时荧光定量PCR法阳性结果判定：以检测值≥500 copies/mL 为阳性。（2）观察指标：观察两种检测方式的MTB 阳性率和诊断的灵敏度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值。

1.4 统计学方法

使用SPSS 25.0 统计软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料采用（± s）表示，行t检验；计数资料用频数（n）和百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 痰涂片检查与实时荧光定量PCR 检查MTB 阳性率比较

实时荧光定量PCR 法MTB 阳性率高于涂片检测法，两种检测方法阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两种检测方法MTB 阳性率比较

2.2 两种检测方法诊断结果，见表2

表2 两种检测方法诊断结果（例）

2.3 观察两种检测方式的诊断效果比较

两种检测方式诊断效果相比，以临床诊断为金标准，实施荧光定量PCR 法检测诊断的灵敏度、特异度、准确度及阴性预测值均高于涂片法，差异有统计学意义（P＜0.05）；两种检测方法诊断阳性预测值比较，差异无统计学差异（P＞0.05），见表3。

表3 两种检测方法诊断的效果比较（%）

3.讨论

结核病是由MTB 引起的慢性传染性疾病，其随着生活环境改变、不合理用药、不良生活方式等因素影响，发病率逐渐呈上升趋势，给大众身体健康以及社会安全带来了许多负面影响，为此加强对该疾病的有效防治是控制疾病进一步传播的关键[8]。病原学检测方式是诊断结核病的重要方法之一，其中涂片法与培养法临床应用较为广泛，培养法具有较高的诊断确诊率，通过专用培养器皿来观察致病菌，但其培养周期较长，易受环境、温度等因素影响，存在假阳性和假阴性情况；涂片法是结核分枝杆菌检查中最常用的检测手段，其简单易行，对检测人员检验操作水平要求不高，但痰液标本中不仅包含MTB，还包括其他非结核杆菌，其也会使抗酸染色，形成假阳性，且部分患者也有结核杆菌染色不明显而漏诊，检测准确性未能得到有效保障，需要寻求另外一种检测方法[9]。随着科学技术的快速发展，结核病实验室检测技术也取得了进一步的发展，新技术的应用提高了结核病的诊断效率，如实时荧光定量PCR 法。

本文结果显示，实时荧光定量PCR 法阳性率（60.00%）高于涂片检测法（42.16%），差异有统计学意义（P＜0.05）；两组检测方式诊断效果相比，实时荧光定量PCR 法检测诊断的灵敏度、特异度、准确度及阴性预测值均高于涂片法，差异有统计学意义（P＜0.05）。充分肯定该检测方法的诊断效果。实时荧光定量PCR 法通过检测结核杆菌DNA 来判断患者是否有MTB 感染情况，进而判断患者是否患有结核病，其能提升MTB 早期检出率的可能。实时荧光PCR 法是将荧光反应物加入PCR 反应体系中，通过监测荧光信号的累积，实现监测PCR 的进程，且还有助于扩张反应体系中荧光强度为依据定量分析特定DNA，能避免检出过程中受污染、环境等因素影响，能提升检测速度及敏感性，能减少假阳性结果出现[10]。该检测方法能够早期诊断MTB 菌血症，防止继发性MTB 病灶形成，且该检测方法仅需2 ～4 h 便能够有效检测某些培养法难以实施病例，提高检测敏感性。此外，该检查方法可以扩张着色活菌，以此来判断病灶良恶性。与普通PCR 方法相比，实时荧光定量PCR 法敏感度更高，由自动化仪器收集荧光信号，避免了检验人员肉眼判断的主观性，能提高检测结果准确性；且全封闭反应，无需PCR 后处理，保证了检验结果的可靠与可重复性；另外在线实时检测荧光，检验结果客观且直观，无需接触有毒试剂，操作安全，省时高效；因此该检测方式适应范围更广，具有较高的应用价值。既往研究表明，实时荧光定量PCR 法对MTB 耐药性有一定的检测价值，能够为临床合理用药提供指导[11]。另有研究表明，应用实时荧光定量PCR 法能够有效分析和观察MTB 感染发生通路，能够帮助临床进一步认识疾病发病机制，从而为后续诊治提供更多可能性[12]。提示应用实时荧光定量PCR 法具有较好的应用前景，可见该检查方法在结核疾病诊治中发挥着重要作用。

值得注意的是，检验过程中可能会因个体免疫差异较大，取材标本中Taq 酶抑制剂因子含量高影响PCR 扩增进程，进而导致假阴性结果出现，且还会受患者用药影响。为进一步提高对病情的判断，可综合其他检查结果来进行评估，以提高准确率，帮助患者尽快接受诊治。

综上所述，结核病对人体安全和社会安全影响大，需要加强防治，应用实时荧光定量PCR 检验方式，能够提高MTB 诊断准确率，能够为患者后续治疗提供有利的诊断依据，临床可应用。