李雯雯 周章军

厦门市海沧医院血液科，福建厦门 361000

弥漫大B 细胞淋巴瘤 （diffuse large B-cell lym phoma，DLBCL）是当前临床发病率最高的非霍奇金淋巴瘤。研究证实，DLBCL 的发生、发展与患者细胞免疫功能状态存在紧密关系。胸腺依赖淋巴细胞（以下简称“T 淋巴细胞”）亚群所介导的细胞免疫在抗肿瘤免疫过程中发挥着免疫调节、抑制肿瘤异常增殖等功能；自然杀伤（natural killer，NK）细胞则发挥免疫监视、杀灭肿瘤细胞等功能。此前研究证实：T 淋巴细胞亚群在DLBCL 患者中存在异常表达，与患者疾病分期和化疗疗效反应密切相关。但有关NK 细胞在DLBCL 患者治疗中检测价值的研究较少。基于此，本次研究针对T 淋巴细胞亚群和NK 细胞活性检测结果在DLBCL 患者治疗中的应用价值进行探讨，分析上述指标变化与疗效的关系，为临床诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年1月至2021年1月在厦门市海沧医院初诊并接受化疗，且取得一定疗效反应（疗效达完全缓解或部分缓解）的80 例DLBCL 患者作为研究对象，其中男48 例，女32 例；年龄32～80岁，平均（58.24±8.51）岁；疾病分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期21例，Ⅲ期30 例，Ⅳ期21 例。本组患者均依据中国临床肿瘤学会淋巴瘤诊疗指南指导化疗，方案包括R-CHOP（利妥昔单抗+环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松）、R-CHOEP（利妥昔单抗+环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+依托泊苷+泼尼松）。依据淋巴瘤疗效评价标准（Lugano 标准）将患者分为完全缓解组（n=44）和部分缓解组（n=36）。完全缓解组中，男25 例，女19例；年龄32～80 岁，平均（57.96±7.76）岁。部分缓解组中，男19 例，女17 例；年龄32～80 岁，平均（60.06±8.44）岁。选择厦门市海沧医院同期40 例体检健康对象作为对照组。对照组中，男25 例，女15例；年龄30～80 岁，平均（59.56±8.22）岁。三组的性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经厦门市海沧医院医学伦理委员会批准（批准号：LW-2022003）。

纳入标准：①患者年龄≥18 岁；②DLBCL 组患者均完善淋巴结或组织病理检查、免疫组化检查，确诊为DLBCL，患者诊断及分类符合WHO 2008 淋巴瘤新分类标准与Ann Arbor 临床分期标准。化疗后疗效评估符合完全缓解、部分缓解标准；③DLBCL 组患者均接受标准剂量的R-CHOP 或R-CHOEP 方案化疗。

排除标准：①其他疾病引起的免疫功能障碍患者；②伴有自身免疫性疾病、严重感染性疾病、严重脏器功能不全患者；③合并其他肿瘤疾病患者。

1.2 方法

所有研究对象均使用流式细胞仪（Beckman 贝克曼公司生产，型号：DxFLEX）完成T 淋巴细胞亚群与NK 细胞活性检测，使用配套试剂。取空腹静脉血样5 ml 并置于提前处理过的抗凝管中标记。将10 μl 单抗置于流式管中，与抗凝处理后的100 μl 外周血样混合，使用微型振荡器以2 800 r/min 速度混合均匀，静置20 min；加入500 μl 溶血素后使用微型振荡器混合均匀，静置20 min；加入500 μl 磷酸盐缓冲液，静置10 min。使用流式细胞仪完成对患者T 淋巴细胞亚群与NK 细胞的检测，包括白细胞分化抗原（cluster of differentiation，CD）的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性。其中DLBCL 组患者检测时间包括初治化疗前，化疗2、4 个周期后第10～14 天（骨髓抑制缓解后）。

1.3 观察指标

比较化疗前、 化疗2、4 个周期后完全缓解组、部分缓解组以及对照组CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平的差异。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 三组化疗前T 淋巴细胞亚群及NK 细胞活性检测结果的比较

化疗前，完全缓解组、部分缓解组CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平低于对照组，CD8水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。完全缓解组与部分缓解组CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 三组化疗前T 淋巴细胞亚群及NK 细胞检测结果的比较（±s）

2.2 完全缓解组患者化疗前后T 淋巴细胞亚群及NK细胞活性检测结果的比较

化疗4 个周期后完全缓解组CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平高于化疗前及化疗2 个周期后，CD8水平低于化疗前及化疗2 个周期后，差异有统计学意义（P＜0.05）；化疗前与化疗2 个周期后完全缓解组CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 完全缓解组患者化疗前后T 淋巴细胞亚群及NK 细胞检测结果的比较（±s，n=44）

2.3 部分缓解组化疗前后患者T 淋巴细胞亚群及NK细胞活性检测结果的比较

化疗前、化疗2、4 个周期后部分缓解组患者CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表3）。

表3 部分缓解组患者化疗前后T 淋巴细胞亚群及NK 细胞检测结果的比较（±s，n=36）

3 讨论

DLBCL 是一组在临床表现、预后等方面都具有极大差异性的恶性肿瘤。该病表现为肿瘤性的大B 淋巴细胞弥漫性增殖，正常淋巴细胞与组织功能受损，病情具有高度侵袭性，自然病程相对较短。而细胞免疫作为人体免疫系统的一项重要组成部分，主要通过对T 淋巴细胞各个亚群的调节以维持人体免疫内环境的稳定性，已有诸多疾病被证实与T 淋巴细胞亚群失衡存在密切关系。T 淋巴细胞的数量和比例是反映细胞免疫功能的重要指标，在肿瘤的发病、进展和转移中都起着至关重要的作用，对治疗反应也有深远的影响。NK 细胞数量减少，活性降低，则会引起机的免疫功能下降，同样是肿瘤进展和远处转移的一项重要原因。

CD3细胞反映体内总T 细胞水平，分为CD4T细胞和CD8T 细胞两大亚群，CD4T 细胞在人体中主要发挥辅助诱导功能，能够诱导其他免疫细胞增殖，具有抑制肿瘤细胞增殖功能。研究证实：CD4细胞参与激活体内巨噬细胞、B 细胞、NK 细胞、 细胞毒性T 细胞等多种效应细胞，并协同上述细胞共同发挥抗肿瘤功能；CD8T 细胞则对CD4细胞、B 细胞有抑制功能，能抑制细胞免疫应答反应和体内抗肿瘤抗体形成。因此人体内CD8细胞水平与抗肿瘤免疫功能呈负相关性，CD8细胞水平升高即代表患者体内肿瘤细胞处于持续增殖状态，疾病持续进展。CD4/CD8值降低，T 淋巴细胞亚群失衡，即提示机体免疫功能低下，肿瘤增殖活跃。NK 细胞具有分泌多种免疫调节细胞因子、产生直接细胞毒活性和介导抗体依赖的细胞毒作用，可杀灭体内肿瘤细胞，发挥抗肿瘤活性。因此NK 细胞是机体免疫系统中防止细胞恶性转化的重要防线。

本研究对DLBCL 患者和健康对象的T 淋巴细胞亚群与NK 细胞活性检测结果进行研究分析，结果显示T 淋巴细胞亚群和NK 细胞活性在DLBCL 患者中存在明显表达异常。DLBCL 患者体内T 淋巴细胞数量与比例失衡，NK 细胞活性下降，与其他学者研究结果相近；进一步对疾病组不同疗效反应上述指标表达水平进行分析： 化疗4 个周期后完全缓解组患者CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平高于治疗前，并且高于化疗2 个周期后，差异有统计学意义（P＜0.05）。说明经过化疗，随疾病状态的改善，患者免疫失衡得以纠正，体内T 淋巴细胞数量和比例均有明显改善，NK 细胞活性上升，展现出良好的治疗效果。与其他研究结果相近。亦有研究显示，疾病临床分期与T 淋巴细胞亚群的CD3、CD8水平、CD4/CD8比例有相关性，并且随着肿瘤分期的增加患者免疫抑制与紊乱更加明显，肿瘤负荷越大，NK 细胞功能也越差。在本研究结果中部分缓解组较对照组指标异常差异更明显，但组内比较化疗前、化疗2、4 个周期后部分缓解组患者CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 细胞活性水平，差异无统计学意义（P＞0.05）。可能是由于本研究中Ⅲ～Ⅳ期患者数量较多，肿瘤负荷更大，免疫紊乱状态更难纠正。因此对DLBCL 患者而言，T 淋巴细胞亚群与NK 细胞检测结果能够评估完全缓解患者的治疗效果，但不能很好地预测部分缓解患者的治疗效果。

综上所述，T 淋巴细胞亚群与NK 细胞活性检测，对DLBCL 患者的诊断及疗效评估均有一定价值，流式细胞术检测淋巴细胞亚群、NK 细胞活性简便易行，可以在更多的患者中推广应用，能更好地评估患者免疫功能状态，并能在一定程度上预测疗效反应，指导治疗。