程文杰，关少君，段博芳

(1.云南农业大学动物医学院，云南昆明 650201；2.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明 650201)

新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(Neosporacaninum)引起的可感染多种哺乳动物的原虫病，犬科动物是新孢子虫的终末宿主[1-2]。其中间宿主包括牛、羊、马等。新孢子虫病传播途径分为垂直传播和水平传播[3]，新孢子虫感染可引起孕畜流产、死胎等，影响肉制品以及乳制品等行业，每年造成的经济损失超过10亿美元[4]。有研究表明在人血清中检测到新孢子虫抗体，虽然没有分离到虫体等证据证明新孢子虫可感染人类，仍然不能忽视新孢子虫的人兽共患潜力[5]。

新孢子虫病是世界性奶牛流产的主要病因[6]，因此关于奶牛新孢子虫病的报道相对较多，而马属动物养殖业是畜牧业的重要组成部分，马属动物的用途由传统的役用逐渐向肉用、娱乐等方向转变，随之而来创造的经济效益也不断增加。Leszkowicz M M等[7]发现，流产母马新孢子虫血清阳性率为70.9%，表明新孢子虫是马流产的重要原因，因此有必要加强关于马属动物新孢子虫的研究。

国外已有关于马、驴等马属动物新孢子虫病的血清学调查报道[8-9]，但国内新孢子虫病的研究对象以奶牛为主，关于马、驴等其他宿主的相关报道相对较少[10]，在云南省已有奶水牛、乌骨羊感染新孢子虫的报道[11-12]，但马属动物新孢子虫感染情况的调查尚未有报道。本研究的目的是调查云南地区马属动物新孢子虫感染情况，以期能为防控马属动物新孢子虫感染提供依据，从而降低该疾病对畜牧业的危害。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 从云南16个地州市中的昆明(114份)、红河(114份)、怒江(55份)、保山(300份)、德宏(150份)、临沧(69份)、普洱(116份)、西双版纳(51份)等8个地区采集马属动物血液共计 969 份，其中马、驴、骡的血液样品分别采集到279份、400份、290份，散养和规模化养殖的马属动物血液样品分别采集到907份、62份。记录采集地区、品种、养殖方式等背景信息。无菌分离血清，保存在-20℃备用。

1.1.2 主要试剂 新孢子虫病ELISA抗体检测试剂盒(双抗原夹心法)，上海酶联生物科技有限公司产品(批号：m1234604)。

1.1.3 主要仪器 微量移液器、八道移液器、Multiskan FC酶标仪，赛默飞世尔科技公司产品；LRH系列生化培养箱，上海一恒科技有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 新孢子虫病ELISA抗体检测 操作步骤与判定标准按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.2.2 数据统计与分析 用SPSS 20.0软件对检测结果进行统计分析，使用χ2检验，以P<0.05时差异显著，P<0.01差异极显著。

2 结果

2.1 不同马属动物新孢子虫抗体检测结果

969份血清中，共有49份血清抗体检测结果为阳性，驴血清抗体阳性率最高，为7.25%；马血清抗体阳性率最低，为1.08%；骡血清抗体阳性率为5.86%。不同马属动物血清样本新孢子虫抗体阳性率差异极显著(P<0.01)，见表1。

表1 不同马属动物新孢子虫抗体检测结果Table 1 Detection results of antibodies against Neospora in different equine species

2.2 不同地区马属动物新孢子虫抗体检测结果

在不同地区分组中，临沧地区马属动物血清抗体阳性率最高，为11.59%；红河地区马属动物血清抗体阳性率最低，为0.88%。不同地区的马属动物血清样本新孢子虫抗体阳性率差异显著(P<0.05)，见表2。

表2 不同地区马属动物新孢子虫抗体检测结果Table 2 Detection results of antibodies against Neospora in equine species from different regions

2.3 不同养殖模式马属动物新孢子虫抗体检测结果

散养的马属动物血清抗体阳性率为4.96%；规模化养殖的马属动物血清抗体阳性率为6.45%。不同养殖模式马属动物血清样本新孢子虫抗体阳性率差异不显著(P>0.05)，见表3。

表3 不同养殖模式马属动物新孢子虫抗体检测结果Table 3 Detection results of antibodies against Neospora in equine species under different breeding models

3 讨论

新孢子虫病呈世界分布，我国包括云南在内的多个地区均有相关报道，但关于马属动物新孢子虫病的研究相对较少。云南省关于马、驴、骡等马属动物新孢子虫感染情况未见相关研究报道。本研究首次调查发现云南马属动物新孢子虫总抗体阳性率为5.06%(49/969)，表明云南省马属动物中存在新孢子虫的感染，8个地区中新孢子虫病抗体阳性率介于0.88%～11.59%之间，说明新孢子虫感染在云南省较为普遍。

Nazir M M等[8]采用cELISA发现巴基斯坦马、驴、骡的新孢子虫抗体阳性率为16.0%、32.6%、26.9%；严生旺等[13]发现青海马、驴、骡的抗体阳性率分别为8.60%、16.67%、0；刘梦丽等[14]通过rELISA发现新疆马抗体阳性率为8.89%；Villa A L等[9]发现意大利马、驴抗体阳性率为8.2%、0；Cruz I等[15]发现葡萄牙马抗体阳性率1.08%。本次调查发现马、驴、骡血清抗体阳性率1.08%、7.25%、5.86%，与已报道的其他国家和地区的新孢子虫病阳性率存在差异，这可能与饲养条件、地理环境以及所使用的检测方法有关。

本研究中不同马属动物血清样本新孢子虫抗体阳性率差异极显著(P<0.01)，驴新孢子虫阳性率显著高于马和骡；不同地区的马属动物血清样本新孢子虫抗体阳性率差异显著(P<0.05)，表明品种与地理因素是影响马属动物新孢子虫感染的重要因素，这与Nazir M M等[8]和Javanmardi E等[16]的研究相一致。犬科动物感染新孢子虫后可持续排放卵囊污染水源与食物[17]，从而引起其他动物的感染。临沧地区新孢子虫阳性率最高，可能是因为当地降雨丰富同时农户散养犬，养殖过程中管理粗放，这些有利于延长卵囊在环境中的存活时间，增大了马属动物感染新孢子虫的风险。应加强引种前检疫，定期检测，淘汰阳性个体，也要限制马属动物与犬的接触。

综上所述，云南省本研究中受调查地区马属动物中存在新孢子虫的感染与流行，总抗体阳性率为5.06%。因此，应加强对调查地区马属动物新孢子虫病的重视，采取有效的防控措施，以保证马属动物养殖业的健康发展。