袁 涛 王 林 陈正权 文坤明（遵义医科大学附属医院普通外科，遵义 563003）

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是世界第三大恶性肿瘤，也是导致癌症相关死亡的第二大原因［1］。以化疗为主的综合治疗是复发及转移性结直肠癌的主要治疗手段。随着化疗方案逐渐完善，越来越多化疗药物在临床上被广泛使用，而化疗过程中对这些化疗药物产生的多药耐药（multidrug resistance，MDR）成为化疗失败的主要原因之一［2］。因此，深入研究产生耐药性的潜在机制并寻求针对性治疗靶点，对提高CRC生存率及改善预后具有重要意义。本课题组前期研究已证实Oct4B1作为一种癌基因能够促进CRC细胞对奥沙利铂的耐药性［3］。为研究Oct4B1调控CRC耐药性的分子机制，课题组采用miRNA芯片筛选出与Oct4B1表达趋势相反的miRNA，并从中找到表达差异最为显著的miR-8063，推测miR-8063可能作为一种抑癌基因在调节CRC耐药性中发挥重要作用。本研究采用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术在CRC细胞SW480、HT29中沉默miRNA-8063基因，观察沉默miRNA-8063是否能够促进CRC细胞获得MDR，并探讨其分子机制是否与激活WNT/β-catenin信号通路有关。

1 材料与方法

1.1 材料人结CRC细胞系SW480、HT29购自上海中科院细胞库；沉默miR-8063慢病毒载体（miR-8063-inhibitor-GFP-PURO）及阴性对照病毒（NCGFP-PURO）委托上海汉恒生物科技有限公司构建；培养SW480细胞的L-15培养基、培养HT29细胞的5A培养基及胎牛血清（FBS）购自美国HyClone公司；2.5%胰酶、细胞全蛋白提取试剂盒和BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术公司；RT-qPCR试剂盒和逆转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；CCK-8试剂购自美国MedChemexpress（MCE）公司；奥沙利铂（OXA）和5-氟尿嘧啶（5-FU）购自美国Sigma公司；……