何杰，王宁，张杉杉，刘青铃，周舟，陈谡，吴学东

1 攀枝花学院附属医院普外科，四川攀枝花 617000；2 大理大学第一附属医院小儿外科

膈肌是身体最主要的呼吸肌，在正常潮式呼吸中，大约80%的呼吸工作由膈肌完成。除参与呼吸运动外，膈肌还可以通过调节腹内压参与调节姿势稳定性；膈肌收缩引起腹压增加，有助于排尿、排便和分娩；膈肌还与血液循环系统以及淋巴液的回流相关［1］。因此，从细胞和亚细胞角度研究作为基本功能单位的膈肌细胞的变化，对揭示膈肌的作用及其机制具有重要意义。流式细胞术可以对组织细胞及亚细胞结构进行分析，制备高质量的单细胞悬液是流式细胞术研究的前提。组织分离、酶解和机械解离是使细胞外基质降解和单细胞分离的三个重要步骤，常用的方法是机械法和机械—酶消化法。机械法适用于一些质地较嫩的组织，如肝脏、脾脏等，这些组织质地松软，易于研磨和碾碎，通过机械法即可获得较为满意的效果。机械—酶消化法是将实体组织剪碎，再根据不同组织选用相应的消化酶，制成单细胞悬液。我们的前期研究显示，采用机械—酶消化法制备的大鼠膈肌单细胞悬液优于单纯的机械法或酶消化法［2-3］。2019 年 6 月—2020 年 6 月，本研究在此基础上，探索机械—酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液的最适宜的消化酶浓度，旨在为研究膈肌获得更优质的单细胞悬液。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康成年SD大鼠6只，购自成都达硕实验动物有限公司，4～5 周龄，体质量80～130 g，雌雄兼用。……