闫肖肖 林小满 孙礼强 韩秋峪

子痫前期(preeclampsia，PE)可累及多个器官功能受损，与孕产妇的不良妊娠结局密切相关[1]。就目前来看，PE的发病机制还不能明确，比如血管内皮功能受到损伤、发生氧化应激和炎性反应等均在PE的发生、发展中起着重要作用[2]。在SPE发病机制的前提条件中，胎盘炎性反应起着重要作用[3]。MCP-1在机体免疫调节、炎性反应中发挥作用得因于其能够趋化、激活单核-吞噬细胞[4]。IL-37是近年来发现的一种抗炎性细胞因子，具有抑制炎性细胞因子表达的作用，在抑制炎性反应方面发挥作用[5,6]。本研究将对重度子痫前期和正常妊娠孕妇血清及胎盘组织中MCP-1、IL-37的表达水平进行分析比较，为重度子痫前期的早期识别及治疗提供帮助。

资料与方法

1.研究对象：收集2020年12月～2021年6月在徐州医科大学附属医院产科住院分娩的90例产妇为研究对象。按照第9版《妇产科学》妊娠期高血压疾病诊断分类标准，分为早发型重度子痫前期(早发组)30例，晚发型重度子痫前期(晚发组)30例，选取30例同期正常产妇作为对照组[7]。本研究纳入的产妇均为住院行剖宫产分娩的单胎妊娠，无高血压、心脏病、糖尿病等慢性疾病史，无自身免疫相关疾病，无感染、炎症及合并有其他内外科疾病。本研究获得笔者医院医学伦理学委员会批准(伦理学审批号：XYFY2021-KL294-01)，所有患者均签署知情同意书。

2.样本采集与保存：所有研究对象住院后，在未进行任何治疗操作前抽取空腹肘静脉血3ml，室温下放置30min后以3000r/min离心10min，用冷存管取离心上清液放于-80℃冰箱中待测。在行子宫下段剖宫产术时，胎盘娩出后10min内，采集母体面中央部位一块约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小、无出血、无钙化灶的胎盘组织，0.9%氯化钠溶液冲洗干净后固定于10%甲醛溶液中，进行石蜡包埋切片。

3.实验方法：ELISA试剂盒(上海雅吉生物有限公司)测定血清上清液中MCP-1、IL-37的浓度，MCP-1、IL-37抗体试剂盒分别购自武汉赛维尔生物科技有限公司、三鹰生物科技有限公司。对胎盘组织进行IHC测定，严格按照各试剂盒说明书进行ELISA和IHC。IHC图片采用Image-pro-plus 6.0软件进行定量分析。

结 果

1.研究人群的特征：3组孕妇的年龄、体重指数(BMI)及孕次之间比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)。将每组产妇在分娩时的孕周进行比较，早发组、晚发组分娩孕周早于对照组，早发组早于晚发组，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 3组孕妇一般资料比较

2.ELISA法检测MCP-1、IL-37的表达水平：血清IL-37在早发组、晚发组中表达水平低于对照组，且早发组比晚发组IL-37表达水平低(P<0.05)；MCP-1在早发组、晚发组中表达水平比对照组高，且早发组比晚发组表达水平高(P<0.05，表2)。

表2 3组孕妇血清中MCP-1、IL-37水平的比较

3.免疫组化法测定MCP-1、IL-37蛋白表达水平：在SPE和正常妊娠产妇的胎盘组织中，MCP-1、IL-37均有表达，其中在合体滋养层细胞的胞质内集中表达IL-37，可见到黄色或棕黄色颗粒沉淀，MCP-1集中表达在绒毛血管内皮细胞以及滋养细胞的胞质内，可见到黄色或棕黄色颗粒沉淀(图1、图2)。进行定量分析可采用Image-pro-plus 6.0软件，可以得到与对照组比较，IL-37在早发组及晚发组中的表达水平更低，且早发组低于晚发组(P均<0.05)；MCP-1在早发组及晚发组中的表达水平更高，且早发组高于晚发组(P均<0.05，表3)。

图1 3组孕妇胎盘组织中IL-37的表达(DAB染色，×200)A.早发组；B.晚发组；C.对照组

图2 3组孕妇胎盘组织中MCP-1的表达(DAB染色，×200)A.早发组；B.晚发组；C.对照组

表3 3组孕妇胎盘组织中MCP-1、IL-37表达的比较

4.血清及胎盘组织中MCP-1、IL-37表达间的相关性：MCP-1与IL-37进行Pearson相关分析结果显示，可以看出血清中IL-37的表达与MCP-1呈负相关(r=-0.902，P<0.01)，胎盘组织中IL-37的表达与MCP-1呈负相关(r=-0.510，P<0.01，图3、图4和表4)。

图3 血清MCP-1与IL-37浓度的散点图

5.血清及胎盘组织中MCP-1、IL-37与孕周的相关性分析：3组产妇分娩孕周进行比较(P<0.05)，为进一步排除由于孕周不同造成MCP-1、IL-37表达的差异，将3组孕妇血清及胎盘组织的MCP-1、IL-37的表达分别与分娩孕周进行相关性分析，可以看到通过Pearson相关分析，3组孕妇IL-37和MCP-1的表达与分娩孕周无相关性(P>0.05，表5)。

图4 胎盘组织MCP-1与IL-37平均光密度值散点图

表4 血清及胎盘组织中MCP-1、IL-37的相关性分析

表5 血清及胎盘组织中MCP-1、IL-37与孕周的相关性分析

讨 论

PE可导致孕产妇死亡，造成母婴不良结局[8]。有研究者认为，SPE在发病机制上早发型与晚发型之间存在差异，早发型SPE由于胎盘某一病理生理方面发生变化导致子宫螺旋小动脉重铸不足，胎盘着床较浅，减少血液对胎盘的灌注，打破炎性细胞因子间的平衡，损害血管内皮细胞功能; 而晚发型SPE的胎盘发育较为正常，但其自身方面可能存在新陈代谢异常[9]。

虽然对于所有的重度子痫前期孕妇都有炎性反应和细胞因子分泌增加，但早发型与晚发型SPE比较有更显著的炎性反应和细胞因子升高[10]。在子宫胎盘螺旋动脉周围，正常孕妇几乎无巨噬细胞浸润，在重度子痫前期孕妇中巨噬细胞大量浸润, 但滋养细胞在重度子痫前期孕妇中的表达较低,这显示子宫螺旋动脉重铸不足可能与巨噬细胞的过度活化密切相关。

MCP-1是趋化因子CC亚族成员之一，是一种具有趋化单核-吞噬细胞作用的细胞因子，与其受体CCR2结合可诱导机体释放大量炎性细胞因子，引起炎性反应。陈巍等[11]研究显示，NO、ET-1及MCP-1水平失衡在PE进展中起重要作用。MCP-1的激活可引起血管壁中单核-吞噬细胞的聚集、炎性细胞因子的释放[12]。IL-37是IL-1家族一种新型抗炎性细胞因子，在单核细胞中进行表达，能够降低促炎性细胞因子的促炎能力，抑制炎症发展[13，14]。有研究显示，IL-37在类风湿性关节炎、心血管钙化患者血浆中的表达显著高于对照组正常人群，并且IL-37表达水平的变化随着疾病活动程度的增加而升高[15，16]。IL-37在湿疹患者中的水平低于对照组[17，18]。聂华等[6]研究表明，IL-37在SPE中的表达明显低于轻度PE及正常产妇。

在本次对血清及胎盘组织的研究中，MCP-1在早发组中的表达明显高于晚发组及对照组，且晚发组高于对照组(P均<0.05)；IL-37在早发组、晚发组中的表达水平明显低于对照组，且早发组低于晚发组(P均<0.05)。这表明，MCP-1的升高可诱导机体释放大量炎性细胞因子，导致机体炎性水平的升高，起到促进疾病发展的作用，可能是由于IL-37抗炎性细胞因子的减少，降低了抗炎效应，导致疾病的进展，而且3组孕妇IL-37和MCP-1的表达水平与分娩孕周无相关性。

综上所述，笔者认为在SPE发生、发展过程中，IL-37表达水平的降低在疾病发展中抑制了抗炎作用发挥，可能由于IL-37抑炎作用的降低，在一定程度上促进了MCP-1促炎性细胞因子的表达，导致炎性反应的失衡，进而促进了炎性疾病的进展，且PE发生越早，MCP-1水平升高越明显，IL-37水平降低越明显，而且导致炎性细胞因子异常表达的原因与妊娠孕周无关。PE发病机制复杂，是多因素综合作用伴发全身多器官功能受损的综合征。本研究对SPE进行炎性细胞因子表达水平的测定，研究结果显示，炎性细胞因子的表达与其病情发生、发展有关，这可能由于炎性反应失衡导致炎性细胞因子表达发生改变，在一定程度上反映炎性反应可能作为发病机制之一参与SPE病情的发展。由于本研究样本量相对较少，后续将进一步扩大研究样本量，旨在对重度子痫前期尤其是早发型重度子痫前期孕妇进行早期诊断和早期治疗提供帮助。