HPLC-MS/MS法测定32%肟菌·咪鲜胺水乳剂 有效成分含量
2022-09-02龚会琴,周亚,谭正莹等
肟菌酯(trifloxystrobin)是由瑞士诺华公司研制、 拜耳公司开发的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，其杀菌谱广、杀菌活性高[1]。咪鲜胺(prochloraz)是由Boots公司合成的广谱高效的咪唑类杀菌剂，具有向顶传导活性，通过抑制麦角甾醇的生物合成达到破坏菌体细胞膜而发挥作用[2]。32%肟菌·咪鲜胺水乳剂是肟菌酯与咪鲜胺的混配制剂，主要登记用于枣树炭疽病的防治，不仅可有效提高防治炭疽菌的效果，同时还可降低病害对单一有效成分肟菌酯和咪鲜胺的抗性风险。
目前关于肟菌酯的检测方法有高效液相色谱法[3-4]、高效液相色谱-串联质谱法[5-6]，咪鲜胺的检测方法有液相色谱法[7-8]、气相色谱-串联质谱法[9]，均为肟菌酯或咪鲜胺单一组分或与其他农药同时检测的方法。然而，有关对肟菌酯和咪鲜胺同时进行分析检测的方法暂未见报道。基于此，本研究以32%肟菌·咪鲜胺水乳剂为研究对象，采用HPLC-MS/MS法开展了同时检测制剂产品中肟菌酯和咪鲜胺的方法研究。
1 材料与方法
1.1 药品和试剂
肟菌酯标准品(质量分数99.2%，国家农药质量监督检验中心)；咪鲜胺标准品(质量分数99.2%，上海市农药研究所有限公司)；32%肟菌·咪鲜胺水乳剂(湖南泽丰农化有限公司)；甲醇(色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司)；甲酸(UPLC/LC-MS级，上海安谱实验科技股份有限公司)；超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm)。
1.2 仪器
1290-6470A型液质联用仪配Masshunter色谱数据处理工作站(美国安捷伦科技有限公司)；XSE205DU型电子天平(梅特勒公司)；明澈超纯水制备系统(Merck Millipore)。
1.3 色谱操作条件
1.3.1 液相色谱操作条件
色谱柱为Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×50 mm，2.7 μm)；进样体积：5.0 μL；流速：0.3 mL/min；柱温：35 ℃；流动相：A-甲醇；B-0.1%甲酸水；洗脱程序见表1。
表1 梯度洗脱程序
1.3.2 MS操作条件
电喷雾离子源(ESI+)，干燥气N2，干燥气温度300 ℃，干燥气流速5 L/min，鞘气N2，鞘气温度250 ℃，鞘气流速11 L/min，雾化器压力(Nebulizer) 45 psi，喷嘴电压500 V，毛细管电压(Capillary) 3 500 V；多反应监测模式(MRM)，离子采集参数见表2。
表2 MRM离子采集参数
上述操作条件是典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。肟菌酯和咪鲜胺标样定性定量离子图谱见图1~2，32%肟菌·咪鲜胺水乳剂样品中肟菌酯和咪鲜胺典型图谱见图3。
图1 肟菌酯标样定性定量离子流色谱图
图3 32%肟菌·咪鲜胺水乳剂样品中肟菌酯和咪鲜胺典型图谱
1.4 测定步骤
1.4.1 标样溶液的配制
分别称取0.010 01 g肟菌酯标样、0.010 03 g咪鲜胺标样于2个不同的100 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得到肟菌酯、咪鲜胺质量浓度分别为99.00、99.40 mg/L的标样溶液。分别取肟菌酯标样溶液1.0 mL、咪鲜胺标样溶液3.0 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，得到肟菌酯、咪鲜胺质量浓度分别为990、2 982 μg/L的混合标样溶液。取该混合标样溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到肟菌酯、咪鲜胺质量浓度分别为9.90、29.82 μg/L的混合标样液，用甲醇-水(体积比50/50)溶液将上述混合标样液稀释成标准系列工作液。
图2 咪鲜胺标样定性定量离子流色谱图
1.4.2 试样溶液的配制
称取约含0.125 3 g的32%肟菌·咪鲜胺水乳剂试样于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得到试样母液；用甲醇-水(体积比50/50)稀释试样母液至适当的浓度。
1.4.3 测定
在1.3节仪器操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针肟菌酯(咪鲜胺)峰面积响应值相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
1.4.4 计算
将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中目标物(肟菌酯、咪鲜胺)峰面积进行平均，试样中目标物的质量分数X1(%)按下式计算：
式中：A1为标样溶液中目标物峰面积的平均值；A2为试样溶液中目标物峰面积的平均值；m1为标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；ω1为标样的质量分数(%)。
2 结果与讨论
2.1 分析方法的线性相关性
按1.3节仪器操作条件对不同质量浓度的标准工作溶液进行分析测定。以肟菌酯(咪鲜胺)质量浓度为横坐标，肟菌酯(咪鲜胺)峰面积为纵坐标，得其线性方程及相关系数，肟菌酯：y=8 784.04x+25.63，R2=0.999 1；咪鲜胺：y=22 118.87x-76.77，R2=0.999 6，说明肟菌酯和咪鲜胺在对应的质量浓度范围内具有良好的线性关系。
2.2 分析方法的精密度
从同一水乳剂产品中准确称取5个试样，于上述1.3节仪器操作条件下分析测定，测定结果见表3。肟菌酯和咪鲜胺的变异系数分别为0.66%和0.57%。
表3 分析方法的精密度试验结果
2.3 分析方法的准确度
称取已知质量分数的32%肟菌·咪鲜胺水乳剂试样5个，分别定量加入肟菌酯和咪鲜胺标样，于上述1.3节仪器操作条件下分析测定，肟菌酯平均回收率为101.01%，咪鲜胺平均回收率为100.50%，测定结果见表4。
表4 准确度试验结果
3 结 论
本文采用HPLC-MS/MS建立了一种同时检测32%肟菌·咪鲜胺水乳剂中2种有效成分的定性定量分析方法。该方法线性关系好、精密度高、重现性好、准确度高，且操作简单快速，可以满足32%肟菌·咪鲜胺水乳剂农药产品质量控制的要求。
