杜博平，李自慧，潘丽萍，孙 琦，吕翎娜，朱传智，邢爱英，贾红彦，张宗德

结核病(Tuberculosis，TB)在新型冠状病毒大流行之前是单一传染源导致死亡的首要原因[1]。结核性胸膜炎(tuberculous pleurisy)是一种常见的结核病类型，其发病率在TB非流行地区为3%～5%，在艾滋病病毒感染比例高的TB流行地区可达30%[2]。结核性胸膜炎可引起胸膜增厚、结核性脓胸、乳糜胸、气胸等并发症，导致肺功能损害、慢性胸痛或呼吸困难，对患者造成极大伤害[3-4]。

早期诊断和及时治疗对于减轻结核性胸膜炎并发症和改善预后至关重要，但其诊断目前仍十分困难。结核性胸膜炎的确诊方法包括：胸腔积液结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，M.tb)病原学阳性(包括涂片、培养或分子生物学阳性)，或胸膜病理符合TB组织病理改变[5]。但胸膜穿刺活检创伤性较大，不适宜作为常规诊断方法，涂片和培养也因胸腔积液中M.tb数量少而检出率非常低(分别<10%和<30%)[6-8]。胸腔积液M.tb分子生物学检测可适当提高结核性胸膜炎的确诊率。例如，世界卫生组织推荐的Xpert MTB/RIF(Xpert)和Xpert Ultra用于结核性胸膜炎诊断的敏感性分别为19%和44%[7]；胸腔积液游离核酸检测诊断结核性胸膜炎的敏感性可达75%[9]。但不同的胸腔积液核酸提取方法对于M.tb核酸检测的影响，如何富集胸腔积液中M.tb核酸以提高检出率等，目前尚报道较少。

本研究采用6种方法提取胸腔积液样本中的核酸，用高灵敏的微滴数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测样本中M.tb特异性核酸的数量，旨在找到有助于分子生物学检测的胸腔积液核酸提取方法，为提高结核性胸膜炎的病原学诊断效率提供指导。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集18例就诊于首都医科大学附属北京胸科医院的结核性胸膜炎患者胸腔积液样本。结核性胸膜炎诊断依据《肺结核诊断WS288-2017》，包括临床诊断病例和确诊病例。患者平均年龄55岁，年龄分布17～89岁，其中男性13例，女性5例。本课题已通过首都医科大学附属北京胸科医院伦理委员会批准。……