牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析
2022-08-23王慧慧冯茜莉蒲飞洋李易聪汪梦竹周小凯赵泽阳马忠仁马晓霞
王慧慧,冯茜莉,蒲飞洋,李易聪,汪梦竹,周小凯,赵泽阳,马忠仁,李 倬,马晓霞
(1.西北民族大学生物医学研究中心,兰州 730030;2.西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730010)
牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是引起牛病毒性腹泻病(bovine viral diarrhea,BVD)及黏膜病(mucosal disease,MD)的主要病原,也称牛病毒性腹泻-黏膜病毒(Bovine viral diarrhea-mucosal diseas virus,BVD-MDV),畜群感染该病毒后临床症状复杂多样,可表现为腹泻、血小板减少、急性或慢性黏膜疾病、免疫抑制、出血综合征和持续性感染,并出现繁殖障碍,即母畜流产、产死胎和畸形胎等,也可由免疫抑制导致呼吸系统、消化系统性疾病[1-2],给全世界范围内的养殖业造成严重的经济损失。BVDV属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus),猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)及边界病毒(Border disease virus,BDV)也属于瘟病毒属,它们之间有较高的相似性,且能突破宿主特异性,存在交叉抗原并且多克隆抗体对BVDV和CSFV具有血清学交叉反应[3-4]。BVDV是有囊膜的单股正链RNA病毒,仅有一种血清型,不同毒株间存在遗传多样性,即存在大量基因亚型[5-8]。根据病毒基因组5′-非翻译区(5′-untranslated region,5′-UTR)序列的差异性,可将病毒分为BVDV-1和BVDV-2两个基因型,并且根据病毒液接种细胞后能否产生细胞病变,可把BVDV毒株分为非致细胞病变型(non-cytopathogenic,NCP)和致细胞病变型(cytopathogenic,CP)两种生物型[9-10]。
BVDV基因组全长大约12.5 kb,整个基因组由5′-UTR、开放阅读框 (open reading frame,ORF)和3′-UTR组成。ORF编码区编码一条长约4 000个氨基酸的多聚蛋白前体多肽链,并进一步由细胞和病毒基因编码的蛋白酶加工成成熟的病毒蛋白,包括4个结构蛋白和8个非结构蛋白[11]。这些蛋白在基因组上的位置从N端到C端依次为:Npro-capsid-Erns-E1-E2-P7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B。……
