孙静宜，李建梅，马英桥，赵 月

微小RNA(miR)是一类高度保守的单链非编码小RNA，可作为致癌基因和抑癌基因在肿瘤发生、发展中起重要调控作用，被认为是潜在的肿瘤标志物和治疗靶点[1-2]。研究发现长链非编码RNA或环状RNA通过调控miR-328-5p表达参与非小细胞肺癌等多种肿瘤的发生发展，有潜力成为多种恶性肿瘤的诊断标志物[3]。多项研究表明，多个异常高活性信号通路已被证实能阻止肿瘤细胞失巢凋亡，其中异常高活化整合素在人类肝癌细胞转移期发挥重大作用[4-5]。但关于miR-328-5p、整合素与乳腺癌发生、进展的关系及具体机制尚未明确[6]。本文分析miR-328-5p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨miR-328-5p与整合素α5(ITGA5)的关系及其调控PI3K/AKT信号通路的具体机制。

1 材料与方法

1.1材料与仪器 乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞系MCF10A，购自美国ATCC细胞库。胎牛血清及RPMI1640培养基购自美国Gibco公司，CCK-8试剂盒购自上海碧云天公司，LipofectamineTM2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司，Matri-gel基质胶及细胞培养板购自美国BD公司。miR-328-5p mimic和miR-NC购自上海美轩生物科技有限公司，兔抗人ITGA5多克隆抗体购自博奥派克生物有限公司，兔抗人ITGA5单克隆抗体购自美国Abcam公司。PCR仪、化学发光仪凝胶成像系统、流式细胞仪及透射电镜购自美国BD公司。

1.2研究方法

1.2.1细胞培养：乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞系MCF10A用含10%胎牛血清RPMI1640培养基培养，培养基中加入双抗青霉素-链霉素，后置于37 ℃、5% CO2培养箱中恒温培养。

1.2.2细胞转染：取生长状态良好的乳腺癌细胞MCF-7，据不同转染方法分为Control组(空白对照)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)、miR-328-5p mimic组(转染miR-328-5p mimic)及miR-328-5p mimic+ITGA5组。……