武 丽 ,贺琪楠 ,刘思彤 ,洪汝丹 ,李 瑞 ,张 垚 ,罗云燕,黎文鸿,刘正祥,尹家祥

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)所引起一种自然疫源性疾病,主要通过媒介蚤在啮齿动物间传播,在一定条件下通过媒介蚤叮咬或者剥食患病动物感染人类,造成人间鼠疫的流行。除啮齿动物外,犬、猫、猪、羊等动物对鼠疫耶尔森氏菌具有低敏感高抗性,染疫后大多能自然痊愈并在体内长时间保留鼠疫菌特异性抗体,常被视为鼠疫指示动物,在我国指示动物血清学调查已作为一种有效手段被纳入鼠疫监测工作中[1-2]。该研究选择在云南省家鼠鼠疫流行曾经较为严重的弥勒市、芒市、梁河县3个地区采集人血清和指示动物血清,检测血清中鼠疫F1抗体,旨在了解云南省家鼠鼠疫疫源地静息期人群和指示动物中鼠疫F1抗体情况,分析鼠疫发生和流行的风险。

1 材料与方法

1.1 样本来源 2019年7－8月,在云南省家鼠鼠疫疫源地选择曾经发生鼠疫疫情比较严重的弥勒市、芒市、梁河县3个县(市)作为研究区域,选择8个发生过2次及以上鼠疫疫情的自然村为研究对象(疫村),同时在5～10 km 范围选择与发生过鼠疫的自然村具有相似特征(如户数、民族等),但从未报告过鼠疫的8个自然村作为研究对照(对照村),共16个自然村。每个村采集人血清不低于20份,采集指示动物血清不低于10份。人采集肘部静脉血,动物采集股动脉血,采血量约5 m L,血液自然沉降后分离血清。采血过程和分离血清严格保持无菌操作,采血前均获得了被采血者和动物主人的同意。

1.2 检测方法 采用间接血凝法(Indirect Heamagglutination Assay,IHA)对采集到的血清进行鼠疫F1抗体检测,对IHA 判定的阳性样本采用上转发光法再次进行检测确认。

1.3 检测试剂 IHA 检测试剂盒试剂批号20200201(兰州生物制品研究所有限责任公司),上转发光法检测鼠疫F1 抗体试剂盒试剂批号20200701(北京热景生物技术股份有限公司)。

1.4 判读标准

1.4.1 IHA 法 空白对照、阴性对照孔不出现凝集现象,阳性对照成立。当抑制列呈“＋＋”凝集的孔比试验列少2孔以上,判定为特异性凝集。阳性最终效价为凝集排呈现“＋＋”的最高稀释度。

1.4.2 上转发光法 MiniUPT 上转发光微生物检测仪与上转发光法鼠疫F1抗体试剂盒配套使用,检测完成后读取MiniUPT 上转发光微生物检测仪上的数值,显示大于0.00的数值即为阳性。

2 结果

2.1 人群血清和动物血清样本采样分布情况 本次调查共采集人血清368份、指示动物血清319份(犬血清307份和猫血清12份)。每个自然村所采集的血清样本数和地区分布情况见表1。

表1 云南省3个县(市)16个自然村血清样本采样分布情况Tab.1 Sampling distribution of serum samples in 16 natural villages of 3 counties(cities)in Yunnan Province

人血清中男性181人,女性187人;平均年龄为44.9岁,最小10岁,最大77岁;傣族185 人,汉族118人,其他少数民族65人(景颇族31人,苗族19人,僳僳族9人,彝族6人)。指示动物中雄性197只,雌性122 只;驯养方式以拴养为主,占69.3%(221/319),散养(12只猫均为散养)占30.7%(98/319)。

2.2 鼠疫F1抗体检测结果 本次研究采用IHA对368份人血清进行鼠疫F1抗体检测,在梁河县对照组芒蒙村检出1份鼠疫F1抗体阳性,滴度为1∶80。该份阳性样本采用上转发光法再次进行检测结果为261.788,确认为阳性。2021年10月再次对该阳性者抽血检测鼠疫F1抗体仍为阳性。对319份指示动物血清进行鼠疫F1抗体检测,检测结果均为阴性。

3 讨论

人群对鼠疫普遍易感,在感染鼠疫得到有效治疗后,患者体内可产生抗体,从被检者体内检出鼠疫F1抗体说明被检者曾被鼠疫菌感染,或者是鼠疫高危地区居民曾注射鼠疫疫苗,也有研究发现在鼠疫疫区未接种疫苗的人中检出鼠疫F1抗体,被认为是隐性感染[3]。指示动物犬和猫捕食小型啮齿动物,感染鼠疫风险较高,与人类接触密切,也增加了人感染鼠疫的风险[4]。若未曾有人间或动物鼠疫报道的地区血清中检测出鼠疫F1抗体,可能是病例并未出现明显的症状而被忽略或者是该地区可能出现小范围的鼠疫流行但未被监测到。此次调查的人群和动物来自于弥勒市,芒市和梁河县。弥勒市在1999—2005年共发生鼠疫疫点96 个,其中人间鼠疫疫点36 个,发现鼠疫患者60 例,动物鼠疫疫点60个,从2006年至今鼠疫进入静息期[5]。1989年芒市就检测出动物鼠疫,2001—2002年在患者和猫血清中各检出鼠疫F1抗体1份,并从芒海镇确诊腺鼠疫病人1例,检测自毙鼠71只,检出鼠疫菌8株,2003 年后鼠疫得到控制[6-7]。梁河县1990—2007年鼠疫流行异常活跃,2001年确诊腺鼠疫病人1例,2003年发现7例腺鼠疫病人,2008年以后疫情得到了有效控制,鼠疫流行进入静息期[8]。本次调查获得的319份指示动物血清样本均未检测出鼠疫F1抗体,说明被调查的三县(市)仍处于鼠疫静息期,当地发生动物鼠疫的风险不高。

本次研究采集的368份人血清里,仅在梁河县芒蒙村1 份人血清样本中检测出鼠疫F1 抗体阳性,但该自然村从未报道过鼠疫病例。为了查找可能的原因,研究团队于2021年10月对该鼠疫F1抗体阳性者再次抽血检测核实并做了深入的调查,发现其血清鼠疫F1抗体仍为阳性。流行病学调查结果显示,该血清阳性者为梁河县芒东镇芒蒙村人,女,1961年出生,傣族,从小居住在该自然村(1984年嫁到本村),主要从事农牧业,周围农作物主要为水稻,家中未饲养犬和猫,未接种过鼠疫疫苗,也未出现过感染鼠疫的症状。在该自然村采集到的20份犬血清和1 份猫血清鼠疫F1 抗体检测均为阴性。团队同时对在该村周围捕获的36只啮齿动物进行反向间接血凝实验检测鼠疫F1抗原,结果均为阴性(结果部分未展示该结果)。但调查发现与该自然村相邻的新寨和金勐自然村曾经发生过鼠疫流行,该血清鼠疫F1抗体阳性者可能的原因是在劳作过程中或走亲戚时被跳蚤叮咬而感染鼠疫菌,因为家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌株毒力较弱,感染后临床症状不明显未引起重视或者自行服药后症状消失。目前,该村村民出现鼠疫F1抗体阳性的情况,尚不能确定确切的原因,但应加强关注,一方面需要加强鼠疫监测,掌握鼠疫发生动态,另一方面可以扩大范围对人群、宿主动物、指示动物、媒介、周围环境等进行鼠疫相关的调查和研究。

(感谢弥勒市CDC、芒市CDC、梁河县CDC 等单位的现场协助,感谢云南省地方病防治所洪梅老师和钟佑宏老师在实验方面的指导)

利益冲突:无

引用本文格式:武丽,贺琪楠,刘思彤,等.云南家鼠鼠疫疫源地人群和指示动物血清鼠疫F1抗体调查[J].中国人兽共患病学报,2022,38(6):553-555.DOI:10.3969/j.issn.1002－2694.2022.00.071