周建宏　　张艳丽　　张利斌

[摘要] 目的 探讨TAZ蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。 方法 收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民医院胸心外科手术切除且经病理确诊的62例非小细胞肺癌组织为试验组，以癌旁组织（距肿瘤缘>5 cm）和21例肺良性肿瘤组织为对照组，采用蛋白质印迹法（westem blot，WB）检测TAZ蛋白表达情况并分析。 结果 蛋白质印迹法检测到TAZ蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达量高于癌旁及肺良性肿瘤组织，差异有统计学意义（P=0.000，0.008，P<0.05）。非小细胞肺癌患者TAZ蛋白表达在肿瘤大小及分化程度分组比较，差异有统计学意义（P=0.036，0.011，P<0.05）。 结论 TAZ可能与非小细胞肺癌的发生、发展相关;TAZ可能成为预测肺癌预后的指标及治疗靶点。

[关键词] 转录共激活因子;蛋白质;非小细胞肺癌;蛋白质印迹法

[中图分类号] R734          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）17-0091-03

Expression and significance of TAZ protein in non-small cell lung cancer

ZHOU Jianhong1  ZHANG Yanli2   ZHANG Libin3

1.Department of Cardiothoracic Surgery， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;2.Department of Anesthesiology， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;3.Department of Thoracic Surgery， The First People′s Hospital of Yunnan Province， Kunming 650032， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of tafazzin （TAZ） protein in non-small cell lung cancer tissues. Methods A total of 62 cases of pathologically confirmed non-small cell lung cancer tissues were collected from June  2010 to January， 2013 in the Department of cardiothoracic surgery of the first people′s Hospital of Yunnan Premoved in the thoracic and cardiac surgery were used as the experimental group， and the adjacent tissues （more than 5 cm away from the tumor edge） and 21 cases of benign lung tumor tissues were used as the control group. The expression of TAZ protein was detected and analyzed by western blotting （WB）. Results WB showed that the expression levels of TAZ protein in non-small cell lung cancer tissues were higher than those in adjacent tissues and benign lung tumor tissues（P=0.000/0.008， P<0.05），with statistically significant differences. There were statistically significant differences in the expression of TAZ protein for patients with non-small cell lung cancer among groups with varied tumor size or differentiation degree（P=0.036/0.011， P<0.05）. Conclusion TAZ may be related to the occurrence and development of non-small cell lung cancer; TAZ may be an index for predicting the prognosis of lung cancer and therapeutic target.

[Key words] Transcriptional coactivator; Protein; Non-small cell lung cancer; Western blotting

肺癌已成为全世界发病率和病死率最高的肿瘤，非小细胞肺癌占约85%[1，2]，尽管手术、放化疗、基因靶向治疗、免疫治疗有了很大的进步，但非小细胞肺癌仍是最具侵袭性的恶性肿瘤之一，5年生存率仍很低，因此发现新的肺癌分子标志物及治疗靶点成为目前研究的一个热点。TAZ是有PDZ结合域的转录辅激活物，作为Hippo信号通路下游的核心组件，在多种实体瘤中高表达，以致癌因子在肿瘤发生、发展过程中起重要作用[3]。TAZ在肺癌、乳腺癌等多种癌症中表达上调或过度激活，较高的TAZ水平或活性与较差的预后和较短的生存期相关[4-6]。本研究以62例经病理确诊的NSCLC组织为试验组，对照组采用距肿瘤边緣>5 cm的癌旁组织及21例肺良性肿瘤（病变）组织，采用蛋白质印迹法（westem blot，WB）检测TAZ蛋白表达并探讨其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民医院胸心外科接受手术切除的62例NSCLC患者临床及病理资料，对照组采用距肿瘤边缘>5 cm的癌旁组织及21例肺良性肿瘤（病变）组织。纳入标准：①所有组织均经病理证实为NSCLC;②所有组织标本均在离体2 min内在液氮及-70 ℃冷藏;③术前未行放、化疗、靶向药物等抗肿瘤治疗者;④临床资料完整者。排除标准：①伴其他恶性肿瘤者;②伴心、肝、肾等重要脏器严重损害者[7]。其中，男43例，女19例;平均年龄（58±10）岁;TNM分期采用第8版UICC（国际癌症控制联盟）肺癌阶段分类[8]。本研究所用标本均得到患者的知情同意。

1.2 主要试剂

哺乳动物组织蛋白抽提掖（武汉博士德），预染Marker（fermentas），兔抗人β-actin抗体（abmart）、兔抗人TAZ抗体（cellsignaling technology），HRP标记驴抗兔IgG抗体、化学发光底物试剂盒（GE healthcare）。

1.3 方法

组织蛋白抽提掖提取组织总蛋白加入蛋白酶抑制剂，使终浓度至1 mmol/L，求得标准曲线并计算组织总蛋白浓度。蛋白变性后取总蛋白20 μg上样，SDS-PAGE电泳90 min（5% 压缩胶90伏电泳30 min，12%分离胶120 伏电泳 60 min），250毫安恒流湿转1 h，NC膜用丽春红染膜液染色，5%BSA液封闭90 min，0.1%TBST液漂洗5次每次4 min，5%BSA液（含0.1%TBST）稀释兔抗人TAZ抗体（1∶1000）或兔抗人β-actin抗体（1：5000），4 ℃过夜后再次漂洗，5%BSA液（含0.1%TBST）稀释HRP标记驴抗兔IgG抗体（1：8000），膜室温温育40 min后漂洗，化学发光底物试剂盒发光，暗盒曝光5～10 min后显影及定影。利用Gel-Pro analyzer灰度分析软件对泳道条带胶片进行灰度分析（各样本IOD值=各组织TAZ IOD值/相应组织β-actin IOD值）。

1.4 观察指标

观察TAZ蛋白在NSCLC、癌旁组织及肺良性肿瘤（病变）组织中的表达情况，并分析TAZ蛋白表达与NSCLC患者临床病理因素（性别、年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小、分化程度、p-TNM分期、淋巴结转移）的关系。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理，计量资料用[M（Q1，Q3）]表示，成组两样本比较采用Wilcoxon Mann-Whitney秩和检验，成组多样本采用Kruskal-Wallis秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Western blot检测TAZ蛋白表达水平

Western blot检测到NSCLC患者癌组织中TAZ蛋白表达高于癌旁组织、肺良性肿瘤组织。见图1。

2.2 Western blot检测TAZ蛋白表达水平灰度分析

NSCLC患者癌组织、癌旁组织中TAZ蛋白IOD值为0.81（0.47，1.19）和0.41（0.21，0.71），癌组织TAZ蛋白表达量高于癌旁组织，差异有统计学意义（P=0.000）;癌组织、肺良性肿瘤组织TAZ蛋白IOD值为0.81（0.47，1.19）和0.54（0.23，0.79），癌组织TAZ蛋白表达升高，差异具有统计学意义（P=0.008）。见表1。

2.3 NSCLC患者TAZ蛋白表达与临床病理因素的關系

临床病理因素分析显示，NSCLC患者TAZ蛋白表达在肿瘤大小、分化程度分组比较，差异有统计学意义（P=0.036，0.011）;在性别、年龄、吸烟史、病理类型、p-TNM分期、淋巴结转移分组中比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

癌症晚期癌细胞转移、扩散成为患者死亡的主要原因，转移患者已从靶向治疗获益生存期延长，但肿瘤转移、扩散过程复杂，与肿瘤细胞微环境等相关，并受多种细胞信号通路调控[9]。基因突变、突变细胞恶性增殖、恶性细胞迁移和侵袭成为恶性肿瘤发生、发展的过程，其复杂过程在不同因素、不同通路、不同阶段中演化。尽管如此，有些肿瘤的发生、发展还是被特定的癌基因驱动[10]。TAZ是有PDZ结合域的转录辅激活物，与细胞增殖、凋亡调控和器官发育相关，通过第89位丝氨酸残基磷酸化与细胞质中的14-3-3蛋白结合，去磷酸化后作为转录辅激活物易位细胞核中[11]，正常生理状态下，TAZ蛋白在肺脏中表达量较高[3]，并在正常组织发育和稳定细胞形态中发挥独特的重要作用[12]。TAZ本质上是参与器官发育及大小控制、组织修复和再生的生理调节。其作为转录共刺激因子调节多种组织器官的稳态。TAZ通过增加干细胞活性维持正常的组织稳态，考虑到TAZ在癌细胞和正常组织中的复合体功能，虽然完全抑制TAZ在癌症治疗中可能有效，但存在破坏正常组织稳态的风险。因此，TAZ抑制剂用于癌症治疗的发展值得高度重视。开发靶向TAZ及其特异性结合位点的选择性抑制剂或激活剂就可能不会干扰正常的组织稳态，并可能获得理想的治疗效果[13]。TAZ在肿瘤进展中具有一定的特征，TAZ在人类多种癌症中均高表达，参与癌症患者的肿瘤转移并导致不良预后，提示TAZ是一种致癌调节剂。因此靶向治疗过表达的TAZ可能是一种有前景的癌症治疗策略，然而TAZ持续失活可能导致组织稳态控制失败。当Hippo信号通路失活时，TAZ被去磷酸化并定位于细胞核内。TAZ与许多调控细胞增殖、分化、迁移、凋亡、衰老等生理转录因子相关，从而导致靶基因的转录激活[14-15]。由于TAZ有助于自我更新和潜能干细胞与许多癌症的发生有关特征，TAZ被认为能更有效地控制癌症，以TAZ为靶点的抗癌药物的开发有望治疗某些类型的癌症，包括皮肤、乳房和肺癌[16]。

本实验通过蛋白质印迹法检测TAZ蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达发现TAZ在癌组织中的表达量高于癌旁及肺良性肿瘤（病变）组织，表达量差异具有统计学意义。TAZ蛋白表达差异在肿瘤大小及分化程度分组中有统计学意义，表明TAZ与肿瘤进展及预后密切相关。本实验结果与文献报道相符合，但遗憾的是在肿瘤分期和淋巴结转移分组中未发现差异，分析可能与恶性肿瘤发生过程是多因素、多通路、多阶段的复杂过程及样本量相对不足等相关。所以，本研究初步结论TAZ可能与非小细胞肺癌的发生、发展相关;TAZ可能成为预测非小细胞肺癌预后的指标、并为肺癌治疗提供靶点。

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