王恒 吉杨丹 唐慧敏 覃建锋 梁子聪 胡先运，2 孟铁宏

(1黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558003；2贵州医科大学天然产物化学重点实验室)

交感神经系统的激活在心血管疾病的发生、发展方面具有重要的作用，甚至认为交感神经系统的激活是心室肥厚的中心环节。去甲肾上腺素(NE)是其主要的交感神经递质。研究报道在体内外实验中，NE可以模拟出心室肥厚的许多特征，如心肌细胞肥大、凋亡及损伤坏死〔1〕等。

Notch信号由受体Notch 1～4、配体Jagged1/2及靶分子Hes-1组成〔2〕。研究证实心血管系统的发育及多种心血管疾病的发展，均与Notch-1信号通路有着密切的联系〔3〕。文献表明转化生长因子β1能够激活心血管系统中Notch通路，调控心脏内皮细胞的增殖与分化〔4〕，且通过调控Notch-1信号可以抑制转化生长因子β1诱导的心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化〔5〕。在醛固酮诱导的大鼠慢性心力衰竭模型中，Notch-1信号也起到关键作用。然而，Notch-1信号在高交感活性诱导的大鼠心肌损伤过程中的作用，目前尚未见文献报道。

氧化苦参碱(OMT)是从中药苦参中提取的喹嗪烷类生物碱，药理作用广泛。研究资料证实，OMT对多种心血管疾病具有良好的疗效，具有强心、降压、抗心律失常〔6〕、对心肌缺血和梗死有保护作用〔7〕，可通过保护线粒体，改善心肌能量代谢〔8〕，减少心肌细胞凋亡，逆转心室重构，改善病毒性心肌炎小鼠心力衰竭〔9〕。前期研究表明，OMT对醛固酮诱导的心肌损伤具有保护作用〔10〕，可以通过调控Notch-1信号改善转化生长因子β1诱导的心肌成纤维细胞增殖及异常分化〔11〕。然而，OMT对高交感活性诱导的大鼠心室肥厚模型中Notch-1信号的影响尚未可知。本研究旨在探索OMT对高交感活性诱导的大鼠心室肥厚的保护作用及其与Notch-1信号的关系。

1 资料与方法

1.1动物 健康雄性SD大鼠50只，体重210～230 g，购自贵州医科大学实验动物中心，合格证号SCXK(黔)2018-0001。

1.2仪器 DS-671电子计重秤(上海寺冈电子有限公司)，722G可见分光光度计(上海仪电分析仪器有限公司)，游标卡尺(桂林广陆书记测控有限公司)，BL-420S生物信号采集与分析系统(成都泰盟软件有限公司)，PT-100生物血压传感器(成都泰盟软件有限公司)，qPCR仪(Applied biosystems)，电泳仪(biorad)，凝胶成像仪(biorad)，核酸浓度测定仪(Thermo)。

1.3药物与试剂 氧化苦参碱(南京广润生物制品有限公司，批号GR133151019)，重酒石酸NE(上海禾丰制药有限公司，批号08200603)，盐酸普萘洛尔(天津力生制药有限公司，批号1909003)，氯化钠注射液(贵州科伦药业有限公司，批号D15052102)，水合氯醛(Solarbio，批号811B0215)，羟脯胺酸试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20180618)，Trizol(Invitrogen，批号10296028)，DEPC水(MDL，批号md911875)，SuperScript Ⅲ RT 反转录kit(ABI-invitrogen，批号11752050)，Sybr qpcr mix(ABI-invitrogen，批号4472920)，Ultrapure Agarose(ABI-invitrogen，批号16500100)。

1.4动物分组、造模与给药 实验分5组，每组10只。即对照组、模型组、OMT高剂量组(50 mg/kg)、OMT低剂量组(25 mg/kg)、普萘洛尔组(50 mg/kg)。各组于造模前1 w开始灌胃给药，对照组及模型组给予等体积蒸馏水，腹腔注射NE 3 mg/(kg·d)复制心肌损伤模型(对照组给予等体积生理盐水)。

1.5大鼠血压指标变化 末次给药1 h后腹腔注射3%水合氯醛10 ml/kg进行麻醉，背位固定于手术台上。分离右侧颈总动脉，插入动脉插管，稳定30 min后，记录大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和平均动脉压(MAP)。

1.6心室重构参数 处死大鼠，取出心脏，游标卡尺测量心长轴(HL)、左心室内径(LVD)、左室前壁厚度(LVAW)，计算重构参数(HL/LVD，LVAW/LVD)。

1.7心肌羟脯胺酸含量检测 称取100 mg心肌组织，加入1 ml水解液，95℃水浴20 min使其水解，之后严格按照试剂盒说明书操作，检测羟脯胺酸含量。

1.8qRT-PCR法检测Notch-1信号 称取100 mg心肌组织，置于RNA储存液中，4℃保存。根据试剂盒说明书提取总RNA后，反转录合成cDNA，按照两步法PCR扩增标准程序95℃ 2 min、94℃ 20 s、60℃ 20 s、72℃ 30 s进行40个循环的扩增，检测Notch-1、Jagged-1、Hes-1的基因表达，以GAPDH为内参基因，采用CFX-Manager软件分析，引物序列：GAPDH上游引物：GTTACCAGGGCTGCCTTCTC、下游引物：GGGTTTCCCGTTGATGACC；Notch-1上游引物：TGC-GTGGACAAGATCAACGA、下游引物：GGTCCCCGTGTAACCTTCTG；Jagged-1上游引物：CAAATGAGTGCGAGGCCAAG、下游引物：AACCAAATCCCGACAGGAGG；Hes-1上游引物：CAACACGACACCGGACAAAC、下游引物：GGAATGCCGGGAGCTATCTT。

1.9统计学方法 采用SPSS20.0软件进行F检验，用Student-t检验进行组间分析。

2 结 果

2.1OMT对高交感活性诱导大鼠血压的影响 NE造模后，模型组血压较对照组显著升高(P<0.05)，与模型组比较，各给药组SBP、DBP及MAP均有不同程度降低，差异显著(均P<0.05)。见表1。

表1 OMT对高交感活性诱导大鼠血压的影响

2.2OMT对高交感活性诱导大鼠心室重构参数的影响 与对照组比较，模型组HL/LVD与LVAW/LVD显著升高(均P<0.05)，与模型组比较，各给药组HL/LVD与LVAW/LVD显著降低(均P<0.05)。见表2。

表2 OMT对高交感活性诱导大鼠心室重构参数的影响

2.3OMT对高交感活性诱导大鼠心肌羟脯胺酸含量的影响 与对照组〔(175.23±11.88)μg/g〕比较，模型组心肌组织羟脯胺酸含量〔(218.34±10.52)μg/g〕显著升高(P<0.05)；与模型组比较，OMT高剂量组〔(180.46±15.33)μg/g〕、OMT低剂量组〔(186.10±17.81)μg/g〕、普萘洛尔组心肌羟脯胺酸含量〔(180.44±9.89)μg/g〕显著降低(P<0.05)。

2.4OMT对高交感活性诱导大鼠心肌组织Notch-1信号mRNA表达的影响 与对照组比较，模型组心肌组织中Notch-1，Jagged-1及Hes-1 mRNA表达均显著增高(P<0.05)。与模型组比较，OMT各剂量组及普萘洛尔组Notch-1，Jagged-1及Hes-1 mRNA表达均显著降低(均P<0.05)。见表3。

表3 OMT对高交感活性诱导大鼠心肌组织Notch-1信号mRNA表达的影响

3 讨 论

心血管系统疾病是全球范围内危及人类生命和健康的“头号杀手”，是当今世界威胁人类最严重的疾病之一。且随着人们的生活方式和饮食结构的变化，社会老龄化程度的增加，心血管疾病患者呈现出年轻化的趋势，并且严重威胁着人类的生活质量和寿命。

心血管系统疾病往往是由于交感神经系统过度活跃及副交感神经系统反应异常低下所致〔12〕。NE是体内主要的交感神经递质和内分泌激素，其在血浆中的浓度高低很大程度上反映了交感神经兴奋状态。而交感神经活性的增加会改变自主神经平衡，进一步增加心脏的不稳定性，导致恶性心血管事件的发生。NE在心肌肥厚、心力衰竭等病理过程中起重要作用，是公认的心肌肥厚因子〔13〕。

血压是心血管系统的基本检测指标，代表血液对血管壁的侧压力。正常血压是保证各系统血液正常供应的基础。本研究结果说明OMT和普萘洛尔可以降低心肌耗氧量，降低血管外周阻力和心室后负荷。

心室重构参数是反映心室肥厚的指标。本研究结果提示HE造模后大鼠发生了心室肥厚，OMT对NE引起的心室肥厚有改善作用。

羟脯胺酸是胶原蛋白的特征性氨基酸，其含量变化反映胶原含量的变化。本研究结果提示NE使大鼠心肌胶原沉积增多，纤维化程度加重。OMT和普萘洛尔可以降低NE引起的心肌胶原沉积，减弱纤维化程度。

近年来Notch-1信号与心血管疾病的关系越来越受到人们的重视，对于Notch信号的研究主要集中在其受体(Notch-1)、配体(Jagged)和下游靶基因(Hes-1)上。本研究结果说明NE诱导大鼠心室肥厚模型中Notch-1信号表达上调；OMT和普萘洛尔改善NE诱导的大鼠心室肥厚可能与降低Notch-1信号的mRNA表达存在相关性。

综上，高交感活性引起心室肥厚的病理过程复杂，涉及多因素、多靶点、多通道。本研究结果提示，在高交感活性诱导大鼠心室肥厚模型中，大鼠血压升高、心室重构、纤维化伴随Notch-1信号的mRNA表达上调。OMT对高交感活性诱导的大鼠心室肥厚有改善作用，可能与降低Notch-1信号的mRNA表达有关。