周林甫, 万群, 赵钢, 张红鸭

1西北大学医学院(陕西西安 710068)； 2空军军医大学西京医院神经内科(陕西西安 710032)； 3深圳大学总医院神经内科(广东深圳 518055)

结核病仍然是全世界最致命的感染性疾病之一，被称为继艾滋病之后的人类第二大杀手，系结核分枝杆菌 (mycobacterium tuberculosis，M.tb) 感染机体所致，多数以呼吸系统受累为主，而结核性脑膜炎 (tuberculous meningitis, TBM) 则是M.tb感染的最严重形式[1]，约占所有结核病1%～5%[2]。尽管给予积极抗结核治疗，仍有超过半数患者最终死亡或遗留严重后遗症[3]。因脑脊液 (cerebrospinal fluid, CSF) 中M.tb涂片镜检、培养等传统检测方法敏感性低，费时费力等不足，使TBM早期诊断仍然面临着很多挑战[4]。随着分子生物学的快速发展，CSF中M.tb核酸检测是当前TBM早期诊断方法研究的热点。然而，由于TBM患者CSF中含有痕量M.tb，并且在标本处理、核酸提取及纯化等过程中可能造成核酸产量和质量进一步下降而影响核酸检测效果[5]。即使是近年来兴起的下一代测序技术 (next-generation sequencing, NGS) 与芯片技术等高通量分析方法也往往受限于样品量过少而无法更好地发挥作用[6]。因此，如何获得足量的病原体基因组DNA是M.tb核酸检测是能否成功的关键。多重置换扩增 (multiple displacement amplification, MDA) 技术是基于噬菌体29 (Phi 29) 高保真DNA聚合酶等温PCR反应的全基因组扩增 (whole genome amplification, WGA) 方法，它可以高保真地将微小数量的DNA成指数级扩增，并可以达到最佳基因组覆盖率和最低的扩增偏差[7-8]。近年来，该技术已经被广泛应用于生物基因检测、胚胎疾病诊断、临床标本病原体鉴定、法医学鉴定及环境样本微生物多样性的相关研究中[9-12]。……