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北京市海淀区妇幼保健院(100089)

30%男性不育是由于遗传疾病，包括非整倍体、染色体结构异常、DNA损伤和基因突变，以及各种新发现的基因[1-2]。位于Y染色体上的AZF基因，也被称作无精子症因子，被发现其片段缺失与男性无精子症或严重少精子症有紧密的联系[3-4]。本研究采取多重PCR技术对392例原发男性不育患者外周血提取的基因组DNA进行AZF检测并进行染色体核型分析，分析原发不育患者Y染色体AZF微缺失和染色体核型异常情况，以探讨其与男性不育之间的关联。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年7月-2021年7月本院收治的392例原发男性不育患者，平均年龄32岁(21～55岁)，其中无精子症患者80例，严重少精子症312例。经患者知情同意，抽取肝素钠抗凝血和EDTA抗凝血各2ml，分别用于染色体核型分析和AZF基因检测。

1.2 方法

1.2.1基因组DNA提取采用基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)抽提DNA，用微量紫外可见分光光度计测定DNA的浓度及纯度。

1.2.2 Y染色体微缺失检测利用Y染色体微缺失基因检测试剂盒(深圳亚能生物技术有限公司)对AZF区内的15个序列标签位点(STS)进行检测，其中6个确定分区的STS，包括AZFa区：sY84、sY86；AZFb区：sY127、sY134；AZFc区：sY254、sY255。还有8个确证是否整段完全缺失的STS，包括AZFa区：sY82、sY1064、sY1065、sY88；AZFb区：sY105、sY121、sY1192、sY153。另外还包括一个异染色体标签sY160。其中，SRY基因作为性别异常对照，人类锌指蛋白基因ZFX/Y作为实验内控。PCR体系及扩增参照试剂盒说明，用凝胶成像系统(美国ALPHA INNOTECH公司)观察拍照并分析结果。

1.2.3染色体核型分析肝素钠抗凝外周血0.5ml接种于淋巴细胞专用培养基(上海乐辰生物科技有限公司)中，37°孵育72h，秋水仙素处理并常规制备G显带，显微镜油镜下进行染色体核型分析。……