卢阳 陈萍 林素仙 王胜男 姜建昌 张智勇 杨美绿

[摘要] 目的 回顾性分析免疫相关性复发性流产患者水溶性B族维生素水平的数据，为临床干预提供参考依据。方法  选取2020年7月至2021年5月在浙江省温州市人民医院就诊的免疫相关性复发性流产患者为流产组（n=40），同期未孕妇女为对照组（n=31），采用高效液相色谱串联质谱分析测定流产组与对照组的外周血中维生素B1、B2、B3、B5、B6、B9水平。结果  流产组与对照组比较，两组的维生素B2、B3、B5、B6水平相比差异无统计学意义（P>0.05）。流产组的维生素B1水平为2.160（1.518，2.505）ng/ml，对照组维生素B1水平为2.710（2.050，3.390）ng/ml;两组的维生素B1水平对比，差异有统计学意义。流产组的维生素B9水平为8.535（6.473，10.850）ng/ml，对照组的维生素B9水平为9.850（8.230，12.650）ng/ml;两组的维生素B9水平对比，差异有统计学意义。结论  维生素B1、B9可能是免疫相关性复发性流产发生、发展的一个重要因素，维生素B1、B9的检测对免疫相关性复发性流产患者的预防及治疗具有一定的临床意义，补充维生素B1、B9是可能的治疗靶点之一。

[关键词] 复发性流产;水溶性B族维生素;维生素B1;维生素B9

[中图分类号] R714.21          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）13-0082-04

[Abstract] Objective To retrospectively analyze the data of water-soluble B group vitamins in patients with immune-related recurrent spontaneous abortion， so as to provide a reference for clinical interventions. Methods A total of 40 patients with immune-related recurrent spontaneous abortion of Wenzhou People′s Hospital in Zhejiang Province from July 2020 to May 2021 were selected as the abortion group and 31 contemporaneous non-pregnant women as the control group. The levels of vitamins B1， B2， B3， B5， B6 and B9 in peripheral blood of the abortion group and the control group were determined by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Results To compare the abortion group with the control group， there were no statistically significant differences in the levels of vitamins B2， B3， B5 and B6 between the two groups （P>0.05）. The level of vitamin B1 in the abortion group was 2.160 （1.518， 2.505） ng/ml， and that in the control group was 2.710 （2.050， 3.390） ng/ml. There was a significant difference in the vitamin B1 level between the two groups. The level of vitamin B9 in the abortion group was 8.535 （6.473， 10.850） ng/ml， and that in the control group was 9.850 （8.230， 12.650） ng/ml. There was a significant difference in the vitamin B9 level between the two groups. Conclusion Vitamins B1 and B9 may be important factors in the occurrence and development of immune-related recurrent spontaneous abortion. Its detection is of certain clinical significance for the prevention and treatment of immune-related recurrent spontaneous abortion. Vitamins B1 and B9 supplementation is one of the potential therapeutic targets.

[Key words] Recurrent spontaneous abortion; Water-soluble B group vitamins; Vitamin B1; Vitamin B9

復发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）指同一女性与同一伴侣持续发生2次及其以上流产[1]，发生率约为1%，是育龄妇女的常见病。该病再次妊娠可能发生自然流产的风险高，对患者家庭幸福与身心健康影响极大。复发性流产原因复杂，包括染色体、解剖、内分泌、自身免疫异常和生殖道感染等常见病因[2]，其中免疫因素在复发性流产中起着重要作用，根据免疫性流产的发病机制不同，可分为自身免疫型和同种免疫型，自身免疫型主要包括自身免疫性疾病和自身免疫性抗体异常[3]。对免疫相关性复发性流产患者进行针对性与规范性的临床治疗，对患者预后有极大的重要意义。因此，本研究观察免疫相关性复发性流产患者与正常人群B族维生素水平的差异，旨在为下一步B族维生素对免疫相关性复发性流产患者的干预进行初探，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

流产组（n=40）选取自2020年7月至2021年5月在浙江省温州市人民医院风湿免疫科就诊的免疫相关性复发性流产患者。对照组（n=31）选取自同期浙江省温州市人民医院就诊的未孕妇女。流产组纳入标准：①就诊时为非妊娠状态，自然流产≥2次;②夫妇双方外周血染色体核型正常;③盆腔彩超除外生殖道器质性病变;④宫颈分泌物检查除外生殖道感染;⑤生殖内分泌激素检查无异常，包括月经周期正常、有排卵、甲状腺功能正常、无糖尿病史、无肝脏、肾脏急慢性疾病;⑥存在免疫异常，包括存在自身免疫性疾病、抗核抗体阳性、抗磷脂抗体间断阳性、甲状腺抗体阳性等，无明显血栓指标异常;⑦近半年内未进行维生素补充治疗。对照组纳入标准：①至少有1次正常生育史，无不良孕产史;②近半年内未进行维生素补充治疗;③无明确慢性病、自身免疫性疾病史。

1.2 方法

留取外周静脉血2 ml，于4℃冰箱避光静置30 min，4℃离心机4000 rpm离心5 min，吸取上清液转移至干净的EP管中立即冻存于-20℃冰箱中待处理。检测时使用多种水溶性维生素样本释放剂试剂盒（杭州佰勤医疗器械有限公司），试剂盒包括A样本释放剂及B样本释放剂。将10 ml A液和水溶性维生素内标液（德国默克公司）按1∶2比例混合，涡旋混匀3 min，放-80℃备用，标记为水溶性维生素内标工作液。用样本释放剂B液作为稀释剂，取各水溶性维生素标准品（德国默克公司）各10 μl，加入稀释液970 μl，制备成最高点浓度的标线，浓度为100 ng/ml，制备水溶性维生素标线，用样本释放剂B液和最高浓度点的标线，依次制备标线的其它浓度点。精密吸取血清样本100 μl置于洁净的离心管中，加入300 μl水溶性维生素内标工作液，涡旋震荡5 min，离心管于4℃，15 000 rpm离心10 min。取上清液200 μl放入1.5 ml的离心管中，于真空浓缩仪中干燥1.5 h，取出加150 μl样本释放剂B液复溶，涡旋3 min，4℃ 15 000 rpm离心5 min，取上清液100 μl进行分析。采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）进行分析。检测单位为杭州佰辰医学检验所有限公司。

1.3 观察指标

研究组及对照组的外周血中维生素B1、B2、B3、B5、B6、B9水平。

1.4 统计学方法

数据用SPSS 23.0统计学软件进行分析，计量资料以中位数四分位间距[M（P25，P75）]表示，采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较

流产组40例，对照组31例。流产组患者的平均年龄30.00（27.25，32.00）岁，对照组的平均年龄31.00（27.00，38.00）岁，两组的一般资料比较，差异无统计学意义（Z=-0.767，P=0.443），具有可比性。

2.2 两组的B族维生素水平比较

流产组与对照组比较，两组的维生素B2、B3、B5、B6水平相比，差异无统计学意义（P>0.05）。流产组的维生素B1水平为2.160（1.518，2.505）ng/ml，对照组的维生素B1水平为2.710（2.050，3.390）ng/ml;流产组的维生素B9水平为8.535（6.473，10.850）ng/ml，对照组的维生素B9水平为9.850（8.230，12.650）ng/ml;两组的维生素B1、B9水平对比，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

复发性流产病因复杂而多样，治疗难度大，给孕妇及家庭造成严重伤害。研究表明，免疫因素是复发性流产极为重要的因素之一[4]。深入研究免疫相关性复发性流产的致病因素及治疗方案，可提高免疫相关性复发性流产患者的妊娠成功率。

维生素是维持人体生命活动必需的一类物质，也是人体所需的七大营养素之一，主要参与机体代谢的调节[5]。维生素分为脂溶性维生素和水溶性维生素。B族维生素都是水溶性维生素，可促进细胞生长和分裂，参与能量代谢[6]。潜在性维生素缺乏病是现代医学的盲点，有专家推测，大约3个人中就有1个可能处于潜在性维生素缺乏症，尤其中老年人、孕妇和儿童，其潜在性缺乏率很高[7]。孕妇和哺乳期妇女对所有维生素、矿物质和微量元素的需要量是平时的1.3～1.8倍[8]。维生素B1也称硫胺素，是最早发现的水溶性B族维生素，在细胞内硫胺素可转变为多种磷酸化衍生物，如焦磷酸硫胺素（thiamine pyrophosphate，TPP）[9]。TPP是維生素B1在细胞内的主要活性形式，也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代谢中重要的辅助因子，对于维持细胞正常代谢、细胞生长和增殖等非常重要[10]。另外研究发现，肠道中B细胞在向浆细胞分化的过程中会发生代谢性改变，Peyer氏斑中的天然B细胞和肠道固有层中的IgA+浆细胞都会利用三羧酸循环来维持细胞代谢[11]，而维生素B1是三羧酸循环中一个必要的辅助因子[12]，且IgA+浆细胞会利用糖酵解代谢，而维生素B1对糖酵解代谢起着重要作用[13]，从而得出维生素B1在免疫中起着一定的作用。维生素B9（叶酸）不足会造成获得性同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代谢障碍，维生素B9缺乏可导致脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）甲基化异常和DNA合成修复的中断，引起甲硫氨酸合成减少，从而造成Hcy在体内蓄积[14]。在早孕期时，过高水平的Hcy对绒毛血管的形成有明显的抑制作用，绒毛血管数目明显减少，从而减少胚胎供血量，导致胚胎着床不良及胚胎死亡[15]。越来越多的临床和流行病学资料显示，高同型半胱氨酸可增加慢性炎症性疾病的风险，高同型半胱氨酸与炎症免疫相关妊娠不良结局相关[16]。体外实验发现，高Hcy可使孕期子宫平滑肌收缩幅度轻度升高，收缩频率显著增加，增加妊娠丢失的发生[17]。

炎癥和免疫是免疫相关性复发性流产的病理基础[18]，正常的炎症是机体防御功能，实验证据表明，炎症对疾病的发生发展起着重要作用，在代谢综合征、2型糖尿病和自身免疫性疾病中最强[19-20]。另有研究表明，营养不良也可促进炎症的发生，并可能促进系统性慢性炎症的发展。这些因素包括加工或精制食品中维生素、矿物质、omega-3脂肪酸等含量偏低[21]。而本研究也证实复发性流产患者的维生素B1、维生素B9较正常人群降低。因此推测维生素B1、B9在免疫相关性复发性流产中可能起着重要作用。

综上所述，免疫相关性复发性流产患者可见血中维生素B1、B9水平下降，维生素B1、B9水平的降低与免疫相关性复发性流产有关。由此提示，对免疫相关性复发性流产患者，补充维生素B1、B9可能对提高妊娠成功率有一定的帮助。

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（收稿日期：2021-07-29）