董源源

摘要 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）可导致多种感染病。万古霉素是治疗感染的最后药物，随着耐药性不断增加，发现了对万古霉素耐药的菌株。本研究通过大肠杆菌表达系统，表达出具有识别活性的可溶性细胞壁结合域（CBD）蛋白，并偶联磁珠（MBs）作为捕获分子，实现分离。通过裂解细菌获得内部的ATP催化化学反应，收集释放的生物发光（ BL ）信号，定量检测目标细菌。结果表明该方法具有简单、快速诊断MRSA的应用潜力。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;细胞壁结合域;生物发光分析

1. 导论

超级细菌的耐药性使诊断与治疗变得困难，给公共医疗资源带来巨大负担。金黄色葡萄球菌可以引起严重感染，随着耐药性增加，很多常用的抗生素都无法用以治疗[1]，还可能可引发疾病。万古霉素是治疗MRSA最后的药物，但由于存在对其耐药的MRSA菌株，给治疗感染带来了巨大困难。CBD是革兰氏阳性菌内溶素的组成部分，负责识别和结合细菌内保守板块，给予了内溶素的特异性。每个细胞上CBD结合位点高达107个，结合能力与抗体相当。CBD具有更宽的识别谱且成分仅为蛋白质，故具有较高安全保障。本研究表达出CBD结合域，以其为生物捕获探针，利用ATP生物发光技术，建立了一种特异性识别MRSA的新方法，利用ATP提取液可以使MRSA分解，进行在实际样中的应用。

2.实验

2.1仪器：蛋白纯化仪来自GE，化学发光检测仪来自Remax，荧光显微镜来自Nikon Instruments，酶标仪来自Molecular Devices，超声波细胞粉碎机来自SCIENTZ，双系统超低温冰箱来自中科都菱。……