壮医药线点灸疗法对原发性痛经大鼠的影响

2022-06-06梁淇棋林娜樊俊宏稂宇嘉黄礼芳刘志珊韦丽乐林艳明

中国民族民间医药·上半月 2022年4期

梁淇棋　林娜　樊俊宏　稂宇嘉　黄礼芳　刘志珊　韦丽乐　林艳明

【摘要】目的：觀察壮医药线点灸疗法对原发性痛经大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺的影响，探讨壮医药线点灸疗法对原发性痛经大鼠模型的作用机理。方法：50只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组，壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组，持续干预7d，比较各组大鼠的扭体反应以及子宫匀浆中PGF2α、NO、Ca²⁺表达水平。结果：正常对照组无扭体，与模型组相比，壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组30 min扭体次数减少（P<0.01），且3组中壮医药线点灸治疗组体抑制率最高;壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组扭体次数差异无统计学意义（P>0.05）。与正常组比较，壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺含量无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较，壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组PGF2α、Ca²⁺值显著降低，NO显著增加（P<0.01）。结论：壮医药线点线疗法治疗原发性痛经的作用机制可能与降低PGF2α、Ca²⁺水平，升高NO水平有关。

【关键词】壮医药线点灸疗法;PGF2α;一氧化氮;钙离子;原发性痛经

【中图分类号】R246.3【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2022）07-0042-04

基金项目：作者简介：梁淇棋（1997-），女，汉族，硕士研究生在读，研究方向为临床医学。E-mail：571710688@qq.com

通信作者：林艳明（1974-），女，壮族，硕士，副教授，研究方向为不孕证中西医治疗。E-mail：kisspsm@tom.com

Effect of Zhuang Medicine Line Point Moxibustion Therapy on Primary Dysmenorrhea Rats

LIANG Qiqi LIN Na FAN Junhong LAN Yujia HUANG Lifang LIU Zhishan WEI Lile LIN Yanming*

Youjiang Medical University for Nationalties，Baise 533000，China

Abstract：Objective To observe the effect of line point moxibustion with Zhuang medicine on PGF2α、NO and Ca2+ in rats with primary dysmenorrhea， and to explore the mechanism of line point moxibustion with Zhuang medicine on rats with primary dysmenorrhea. Methods 50 female SD rats were randomly divided into normal control group， model control group， zhuang nationality thread moxibustion group， aspirin group， Danggui Shaoyao powder group. After continuous intervention for 7 days， the writhing reaction of each group and the expression levels of PGF2α、Ca²⁺and NO in uterine homogenate were compared. Results There was no body twisting in the normal control group. Compared with the model group， the number of body twisting in 30min in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group， the Aspirin treatment group and the Danggui Shaoyao powder group decreased P<0.01）， and the torsion inhibition rate in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group was the highest. There was no significant difference in the number of body writhing between Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group （P>0.05）. Compared with the normal group， the contents of PGF2α、Ca²⁺and NO in Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group were not statistically significant （P>0.05）. Compared with the model group， thePGF2α、 Ca²⁺value of Zhuang Medicine line-point moxibustion treatment group， Aspirin group and Danggui Shaoyao powder group was significantly decreased， and NO was significantly increased （P<0.01）.Conclusion The mechanism of Zhuang medicine line point-line therapy in the treatment of primary dysmenorrhea may be related to the decrease of PGF2α、Ca²⁺and increase of NO.42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

Key words：Zhuang's Herbal Moxibustion;PGF2α;NO;Ca²⁺;Primary Dysmenorrhea

原發性痛经是妇科常见病症，临床上主要表现为经前后或行经期发生下腹坠胀、胀痛、伴有腰酸或其他不适，严重影响患者健康及生活质量^[1^]。原发性痛经的发病机制尚未完全阐明，现代医学^[^2-4^]认为其发生与内分泌、遗传、代谢及免疫等因素有关。西医治疗主要以对症处理为主。壮医药线点灸作为广西特色民族疗法，在治疗痛经上有显著疗效，但其治疗机制尚缺乏现代科学的证据^[2^]。本实验运用壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经大鼠模型，通过观察大鼠扭体次数及大鼠血清中PGF2α、NO、Ca²⁺离子水平的变化，探究壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经的可能机制。

1 资料与方法

1.1 实验动物采用昆明种大鼠50只雌性，鼠龄9～10周，体重（200±20）g，性成熟，未交配，由右江民族医学院动物实验中心提供。大鼠正常饲养1周后，随机分为壮医药线点灸治疗组、阿司匹林组、当归芍药散组、空白对照组、模型对照组，每组各10只。

1.2 材料壮医药线（直径0.7 cm，广西中药医大学壮医药推广中心）;补佳乐（拜尔医药保健有限公司广州分公司）;阿司匹林肠溶片（拜尔医药保健有限公司）;缩宫素注射液（上海全宇生物科技动物药业有限公司）;蒸馏水、生理盐水;前列腺素 ELISA 试剂盒（上海酶联生物）;NO 测试盒、蛋白测试盒、钙测试盒（南京建成生物工程研究所）;当归芍药散（右江民族医学院药剂科提供）。

1.3 动物造模及各组干预方法

1.3.1 样品制备称取当归芍药散处方：当归20 g，川芎10 g，白术12 g，茯芩10 g，泽泻10 g，芍药20 g，加10倍量水，浸泡20 min，煎煮1 h，取煎出液，再加8倍量水煎煮40 min，合并2次煎煮液，浓缩制成浓度为1 g/mL水煎液;1 mg补佳乐片研碎溶于20 mL纤稀钠中制成0.05 mg/mL混悬液;100 mg阿司匹林肠溶片研碎溶于5 mL纤稀钠中制成20 mg/mL混悬液。

1.3.2 动物造模除空白对照组外，所有大鼠适应性喂养1周后，采用补佳乐和缩宫素注射液联合制造大鼠原发性痛经模型。具体方法如下：壮医药线点灸组、阿司匹林组、当归芍药组和模型对照组，于中午12：00灌胃补佳乐混悬液10 mL/kg，正常对照组给予10 mL/kg生理盐水灌胃，连续给药12 d。于末次给药后1 h腹腔注射缩宫素100 U/kg，正常组注射生理盐水10 mL/kg。

1.3.3 干预方法从造模第5天起，每天下午17：00进行1次干预，连续 7 d。壮医药线点灸组参照方宗畴等编著的《实验大鼠针灸俞穴图谱及针刺手法》取穴人中、归来、足三里、中极、肚脐（周围）、关元，一人将实验操作部位充分暴露，另一人点燃药线线端后熄灭明火，将带火星的线端对准穴位，标准为一按一灭即起为一壮，每穴予灸2壮。阿司匹林组剂量按50 kg成人体表面积折算，每只大鼠予阿司匹林肠溶片混悬液200 mg/kg即10 mL/kg灌胃，当归芍药散组同按50 kg成人体表面积折算，每只大鼠予当归芍药散水煎液10 g/kg即10 mL/kg灌胃，空白对照组和模型对照组不进行干预，只予生理盐水10 ml/kg灌胃做等容积液体进入胃内容对照。上述操作均在大鼠安静状态下，温暖的环境中进行。

1.4 观察指标

1.4.1 扭体反应第12天灌胃给药1 h后，腹腔注射缩宫素100 U/kg（正常组注射生理盐水 10 mL/kg），观察记录大鼠30 min内扭体次数，计算扭体抑制率。扭体反应标准：大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋。抑制率=（模型组大鼠扭体次数-给药组大鼠扭体次数）/模型组大鼠扭体次数×100%。

1.4.2 子宫匀浆组织PGF2α、NO、Ca²⁺测定于末次给药后1h，大鼠颈椎断头处死，迅速剖腹，取出子宫，以冰冻的生理盐水洗净拭干称重，制成5%的子宫组织匀浆，以2500 r/min低温离心10 min，取上清液冷藏保存待测。子宫组织前列腺素 F2α （PGF2α）的含量采用ELISA法检测;NO、Ca²⁺含量测定采用微板法。均按试剂盒说明书的实验步骤严格操作。

1.5 统计学处理所有数据采用SPSS18.0统计软件分析，计量资料以均数加减标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较的q检验（Newman-Keuls法），P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠30 min内扭体反应比较空白对照组未出现扭体反应，模型对照组大鼠扭体次数明显增多，差异有统计学意义（P<0.01），提示造模成功;各治疗组与模型对照组比较，30 min内扭体次数减少，扭体抑制率上升（P<0.01）;壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组扭体反应次数均无统计学差异（P>0.05）;且阿司匹林组和壮医药线点灸组扭体抑制率均>80%，说明阿司匹林组和壮医药线点灸组镇痛效果佳。详见表 1。

2.2 各组大鼠子宫匀浆组织PGF2α、NO、Ca²⁺值比较与空白对照组比较，模型组大鼠子宫内膜 PGF2α含量明显升高，同时模型组NO值升高，Ca²⁺值降低，差异有统计学意义（P<0.01）;壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组与模型组比较，PGF2α值、Ca²⁺值降低，NO值升高，差异有统计学意义（P<0.01）;各治疗组间NO值、Ca²⁺值均无统计学差异（P>0.05），提示壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组对原发性痛经有效，且壮医药线点灸组与当归芍物组、阿司匹林组之间相比疗效相当。见表2。42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

3 讨论

原发性痛经属壮医“火路病”范畴，是较为普遍的妇科疾患。近年来，原发性痛经的发病率逐渐升高，寻找最有效的治疗方法极其重要，而中医药在治疗原发性痛经取得效好的效果，是值得深入挖掘研究的有效资源^[5-7^]。壮医药线点灸疗法是壮医最具特色的一种治疗方法，具有通络止痛、活血化瘀、散结消肿、温经行痹等作用^[^8-9^]。本实验采用补佳乐和缩宫素注射液联合制造大鼠原发性痛经模型，根据中医经络选穴原则，选取人中、归来、足三里、中极、脐周四穴、关元等穴位，用壮医药线灼灸刺激穴位，调节气血，达到活血化瘀，温经散寒，气血调和的作用。研究表明，痛经的发生主要是由于前列腺素（PGs）分泌过多导致子宫异常收缩引起的^[10^]，同时与NO、Ca²⁺的变化密切相关，其中PGF2α属于前列腺素中的一种，可刺激子宫收缩和缺血，导致痛经^[11^]。Ca²⁺作为在细胞收缩中起重要作用的第二信使，刺激后可通过细胞内钙离子的释放和胞外的内流，子宫平滑肌细胞内Ca²⁺超载引起能量耗竭、细胞膜受损，此外还可以导致子宫肌挛缩^[^12-13^]。NO是一种血管内皮舒张因子，可通过NO-环磷鸟苷（cGMP）途径调节，或直接作用于细胞膜上的钙通道，引起钙离子外流或加速细胞内游离钙的结合，从而引起平滑肌细胞舒张和血管扩张。本实验结果显示，壮医药线点灸疗法能够降低PGF2α、Ca²⁺值，并使NO水平升高，抑制扭体反应。其作用机制可能是通过调节PGF2α、Ca²⁺、NO水平，缓解子宫平滑肌痉挛引起的缺血再灌注损伤，抑制子宫痉挛从而达到解除或缓解疼痛的目的。同时壮医药线点灸组、当归芍物组、阿司匹林组之间子宫匀浆PGF2α、NO、Ca²⁺对比无明显差异，提示壮医药线点灸疗法与临床常用药物疗效相当。因此，壮医药线点灸疗法治疗原发性痛经具有明显的疗效，值得在临床上进一步推广。