钱丽 刘凯 马元锋

摘 要 目的：探讨注射用阿奇霉素含量测定样品降解的影响因素，提高含量检测结果的精密度。方法：从人、机、料、法、环、测6方面分析，开展假设性试验探究注射用阿奇霉素含量测定样品降解的影响因素。结果与结论：发现进样小瓶的材质是影响注射用阿奇霉素含量测定的一个重要因素，对提高测定结果的可靠性，具有重要的指导意义。

关键词 注射用阿奇霉素 稳定性 影响因素 降解

中图分类号：R927.2； R978.15 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2022）07-0096-03

引用本文 钱丽， 刘凯， 马元锋. 探讨注射用阿奇霉素含量测定样品降解的因素[J]. 上海医药， 2022， 43（7）： 96-98.

Discussion on the factors affecting the content determination of azithromycin for injection sample

QIAN Li， LIU Kai， MA Yuanfeng

（Yangtze River Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Taizhou 225300， China）

ABSTRACT Objective： To explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection sample and to reduce its relative standard deviation. Methods： From the aspects of human， machine， material， method， ring and measurement， an experiment was carried out to explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection. Results & Conclusion： According to the test results， a clear conclusion can be drawn to guide the routine determination of the azithromycin content.

KEy wORDS azithromycin for injection； stability； influencing factor； degradation

阿奇霉素临床应用广泛，其含量测定方法有许多报道[1-4]，而《中华人民共和国药典》2015版采用抗生素微生物检定法进行阿奇霉素的含量分析，尽管该法能真实体现该药品的抗菌活性，但检验周期较长、操作较繁琐[5-6]。HPLC法专属性强、灵敏度高、准确度和重复性好、省时方便，因而是阿奇霉素含量测定的常用方法[7]。

日常检测过程中发现，阿奇霉素含量测定随着时间的延长，峰面积呈下降趋势。为了提高检测结果的可靠性，严格把控药品质量，以保障患者用药安全，本研究采用鱼骨图，从人、机、料、法、环、测6方面分析，开展假设性试验，探究阿奇霉素含量测定中对样品降解的影响因素，以便指导阿奇霉素含量测定的日常工作。

1 材料和方法

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）、 XS205电子天平（梅特勒托利多公司）。

1.2 试药

阿奇霉素对照品（批号130593-201303，含量94.4%，中国食品药品检定研究院）；注射用阿奇霉素（批号18082711，扬子江药业集团有限公司）；阿奇霉素（批号103-180306-11，浙江国邦药业有限公司）；乙腈（色谱纯，Merck公司）；磷酸二氢铵（优级纯）、浓氨水、磷酸氢二钾及磷酸（分析纯）均购自国药集团化学试剂有限公司。

1.3 材料

透明玻璃小瓶（批号5182-0864、5182-9062）、聚丙烯内衬小瓶（批号5190-2242）、安捷伦塑料小瓶（批号5182-0567）、脱活小瓶（批号5183-2071）、A-Line惰性小瓶（批号5190-9589）均购自安捷伦公司；塑料小瓶（批号330209，OmniGene公司）；透明塑料小瓶（批号GL0410，GL公司）；磨砂塑料小瓶（批號 C4000-11，Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

1.4.1 色谱条件

采用Waters XBridge C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 mm），以磷酸盐缓冲溶液（取0.05 mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%磷酸溶液调节pH至8.2）-乙腈（45∶55）为流动相，稀释剂：磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.73 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，用浓氨水调节pH至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7∶7∶6），检测波长210 nm，柱温40 ℃，流速1.0 mL/min，进样量50 mL进行HPLC测定，借助外标面积法对阿奇霉素的含量进行计算。

1.4.2 溶液

1）对照品溶液 精密称定阿奇霉素对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL约含阿奇霉素1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2）供试品溶液 取注射用阿奇霉素（0.5 g）约210 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水2 mL（50 mg阿奇霉素加水1 mL）溶解后，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（质量浓度1 mg/mL）。

2 结果

阿奇霉素样品溶液含量测定相对标准偏差值偏高，查看阿奇霉素含量测定样品溶液图谱，发现在主峰相对保留时间（RRT）约1.4 min处有降解峰（图1），故含量测定相对标准偏差值偏高的原因为样品降解。

针对阿奇霉素样品溶液容易发生降解这个问题，从人、机、料、法、环、测6方面分析，找出可能影响阿奇霉素降解的因素（图2）。

通过上述分析结果，最终找到9条末端因素，其中人、机、法未发现问题，故着重对料、环、测进行分析，最终确认要因。

2.1 试剂影响

目前我们使用的乙腈是色谱级别，分别采用Fisher或Merck公司的乙腈配制稀释剂，且将稀释剂pH分别调节为9.4、9.6、9.8、10.0、10.2开展实验，结果表明，不同厂家的乙腈、不同pH稀释剂配制的供试品溶液稳定性良好，其导致样品降解的因素可排除。

2.2 色谱柱影响

色谱柱使用前冲洗程序：①100%甲醇溶液冲洗20 min；②10%甲醇溶液冲洗30 min；③流动相冲洗30～60 min。色谱柱使用后冲洗程序：①10%甲醇溶液冲洗90 min；②100%甲醇溶液冲洗120 min。

按标准操作规程冲洗色谱柱后进样空白溶液测定，均未发现有残留物存在（图3），故排除色谱柱污染导致样品降解。

2.3 进样盘温度影响

在日常检测过程中，进样盘温度在未控温条件下发现样品降解，故考察进样盘于控温5 ℃条件下样品溶液的稳定性，并用全新的安捷伦棕色玻璃进样小瓶进样。结果表明，对照品、原料及制剂的峰面积均呈下降趋势，同样存在降解，故排除未控制进样盘温度而导致样品降解（表1）。

2.4 进样小瓶材质影响

在室温条件下考察阿奇霉素供试品溶液在不同进样小瓶中存放不同时间对含量测定的影响。样品液在全新的透明玻璃进样小瓶较棕色的玻璃进样小瓶降解速度略快，样品液的稳定性在经清洗的透明旧玻璃小瓶中较新玻璃小瓶好，说明阿奇霉素含量测定溶液在硼硅玻璃中确实不稳定，容易降解（图4）。

进而采用多种进样小瓶考察溶液的稳定性。综合对比表明，阿奇霉素溶液在安捷伦脱活小瓶中稳定性很差，在安捷伦A-Line惰性玻璃进样小瓶中稳定性较差，而在塑料小瓶中的稳定性较好（图5），但其含量测定结果均呈下降趋势。为降低今后样品检测时出现的异常风险，尽量不使用玻璃小瓶，故在操作规程中须规定使用安捷伦塑料小瓶进样。

通过对上述9条末端因素的分析，表明进样小瓶材质对阿奇霉素溶液的稳定性有影响，其在硼硅玻璃小瓶中不稳定，容易降解，应当选用安捷伦塑料小瓶。

3 讨论

本研究发现阿奇霉素溶液在玻璃进样小瓶中稳定性差，而在塑料进样小瓶中稳定性较好，推测阿奇霉素降解与进样小瓶玻璃材质有关。在中国药典中规定进样小瓶材质为塑料小瓶，在此条件下的后续含量检测均符合规定，且阿奇霉素含量测定相对标准偏差值降低。但此次研究未发现玻璃进样小瓶导致阿奇霉素样品降解的真实原因，后续将对此进行深入研究。

参考文献

[1] 王立， 王静. HPLC測定阿奇霉素干混悬剂的含量[J]. 航空航天医学杂志， 2010， 21（12）： 2284-2285.

[2] 潘强. HPLC法测定阿奇霉素片的含量[J]. 中国药品标准， 2009， 10（4）： 301-303.

[3] 刘珂， 张亚杰. HPLC法测定阿奇霉素及阿奇霉素胶囊的含量[J]. 中国药师， 2010， 13（1）： 81-82.

[4] 韩振爽， 李玮玮. 高效液相色谱法测定阿奇霉素片中阿奇霉素含量[J]. 天津药学， 2013， 25（1）： 15-16.

[5] 国家食品药品监督管理局. 国家药品标准[S]. 第三十七册. WS1- （X-135） -2003Z.

[6] 李妍， 孙淑娟， 苏乐群， 等. 微生物法测定阿奇霉素人体血清浓度的影响因素考察[J]. 药学服务与研究， 2006， 6（4）： 298-300.

[7] 国家食品药品监督管理局药品认证管理中心. 药品GMP指南： 质量控制实验室与物料系统[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2011： 129-143.