何卫东，杨柳清，林 姿，徐林诗，刘建帅

（1.福建中医药大学附属人民医院，福建 福州350004；2.福建中医药大学，福建 福州350122）

糖尿病及其并发症已成为严重危害人类健康的世界性公共卫生问题，其防治研究意义重大。氧化应激损伤是糖尿病血管并发症的重要发病机制，Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（kelch-like epichlorohydrin associated protein-1，Keap1）/核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2，Nrf2）信号通路是调控糖尿病氧化应激损伤的重要信号通路。中医药治疗糖尿病及其血管病变有一定的优势，阴虚血瘀是消渴全病程的重要病机，地红方具有滋阴活血的功效，临床治疗糖尿病效果显著。因此，本课题通过体外细胞实验，围绕氧化应激Keap1/Nrf2信号通路研究地红方干预糖尿病血管内皮细胞损伤的机制，为滋阴活血法在糖尿病及其血管并发症的临床应用提供客观依据，并为同类研究提供借鉴。

1 实验材料

1.1 实验动物和细胞 SPF级雄性SD大鼠50只，7周龄，体质量（300±15）g，分笼饲养，自由摄水，温度（23±2）℃，湿度50%～70%，通风良好，12 h光照明暗交替。人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC），于恒温37℃、5%CO2、95%湿度的无菌培养箱中培养。每1～2天更换MEM培养液1次；4～5 d细胞长满后传代，选择第三代细胞用于实验。

1.2 实验药物 地红方药物组成：熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、茯苓、牡丹皮、葛根、天花粉、桃仁、红花、当归、白芍、川芎、丹参。药材均经专业人员鉴定，不含重金属。药材先用5倍量清洁自来水清洗2遍，再以10倍量的蒸馏水浸泡0.5 h，用700瓦的火力煎煮1 h，过滤药液；第2遍煎药时加6倍量清洁自来水，同等火力煎煮40 min，再次过滤。将2次滤液合并，再以700瓦火力煎煮浓缩至1 g/mL浓度药材的药液（即1∶1药液），无菌包装，实验备用。……