李 杉，覃子龙，陆梅元，马秀梅，曾海生

（1.广西壮族自治区食品药品审评查验中心，南宁 530029；2.柳州市质量检验检测研究中心，广西 柳州 545001；3.右江民族医学院附属医院，广西 百色 533000）

金线草为蓼科植物金线草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草，别名重阳柳、毛蓼、人字草等［1］，主要分布于广西、云南、湖南、湖北等地。金线草主要含有黄酮类、有机酸、香豆素等化学成分［2，3］。金线草味涩微苦，性平，有活血舒筋、行气止痛、抗菌消炎、止血生肌等功效，用于跌打损伤、外伤出血、劳伤等疾病［2，4，5］。黄酮类化合物是一类植物体内的次级代谢产物，具有清除自由基、抗肿瘤、抗病毒、抗炎和抗菌等作用，且无毒无害，广泛应用于食品、药品、保健品等领域［6］。

本研究采用薄层色谱法对金线草药材进行鉴别，使用高效液相色谱法对金线草中的芦丁、槲皮素、山奈酚的含量进行测定，建立其药材鉴别和含量测定方法，并为开展药材品质评价、建立该药材质量控制方法及进一步开发利用提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 金线草药材于2020年9月采自广西靖西市，金线草由右江民族医学院附属医院药学部曾海生副主任药师鉴定为蓼科植物金线草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草。样品阴干，粉碎至备用。

1.1.2 试药 硅胶G薄层板；甲醇、乙醇、甲酸乙酯、甲酸、氯仿、二氯甲烷（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（美国Fisher公司，色谱纯）；磷酸为分析纯。芦丁对照品（批号：205128，上海融禾医药科技有限公司）；槲皮素对照品（批号：100081-200408，中国药品生物制品检定所）；山柰酚对照品（批号：110861-202012，中国药品生物制品检定所）。

1.1.3 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（Agilent 1260色谱工作站、DAD检测器）、电子分析天平（AG1353型，瑞士Mettler-Toledo公司）、超声波清洗器（KQ-250-B型，昆山市超声仪器有限公司）、101A-3E型电热鼓风干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）。

1.2 薄层鉴别

1.2.1 对照品溶液的制备 使用电子分析天平分别精密称取适量芦丁对照品、槲皮素对照品、山奈酚对照品，利用甲醇溶液溶解并分别定容至10 mL容量瓶中，制得浓度分别为0.72、0.98、0.85 mg/mL的对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备 精密称取金线草1 g，放入具盖锥形瓶中，然后加入25 mL甲醇溶液，称定其重量，加热回流提取1 h，趁热滤过，蒸干，残渣加入1 mL甲醇溶液使其溶解，作为供试品溶液。

1.2.3 薄层层析条件 硅胶G薄层板（10 cm×10 cm）；吸取供试品溶液6μL，芦丁对照品、槲皮素对照品、山奈酚对照品溶液2μL，分别点于同一块硅胶G板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（10∶3∶1.5）为展开剂，展开，晾干，喷3%三氯化铝-乙醇溶液，晾干，置紫外灯（360 nm）下检视。

1.3 HPLC含量测定

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B）水溶液，梯度洗脱（0～20 min，10%-＞32%A；21～45 min，32%-→48%A；46～60 min，48%-→62%A；61～80 min，62%-→10%A），流速：1 mL/min，进样量：10μL，柱温：30℃，检测波长：370 nm。色谱峰与其他杂质峰有很好的分离度（图1）。

图1 对照品（A）和样品甲醇提取物（B）色谱图

1.3.2 制备对照品溶液 使用电子分析天平分别精密称取适量芦丁对照品、槲皮素对照品、山奈酚对照品，甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中，制得浓度分别为0.25、0.18、0.42 mg/mL的混合对照品溶液。

1.3.3 样品的制备 精密称取金线草1.0 g，放入具盖锥形瓶中，然后加入25 mL甲醇，称定其重量，加热回流提取1 h，冷却到室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，轻摇后滤过，取续滤液离心后过0.22μm滤膜，即得样品溶液。

2 结果与分析

2.1 薄层鉴别试验结果

薄层色谱图试验发现，金线草药材在与芦丁对照品、槲皮素对照品、山奈酚对照品斑点的相同位置处，均有相同颜色斑点，且斑点较清晰（图2）。

图2 金线草药材TLC鉴别

2.2 方法学结果

2.2.1 线性关系 在“1.3.1”色谱条件依次进样10μL，以浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标绘制标准曲线，即得各成分线性回归方程及相关系数分别为：芦丁：y=17 905x-15.915，r=0.999 4，在浓度为2.12～100.80μg/mL范围内线性关系良好；槲皮素：y=33 029x-9.054，r=0.999 8，在 浓 度 为25.50～758.86μg/mL范围内线性关系良好；山奈酚：y=30 464x+0.722 3，r=0.999 5，在浓度为2.62～250.48 μg/mL范围内线性关系良好。

2.2.2 精密度 精密吸取“1.3.2”项下混合对照品溶液，按照“1.3.1”项下色谱条件连续进样6次，分别记录对应的峰面积，芦丁、槲皮素、山奈酚峰面积的RSD分别为0.56%、0.32%和0.89%，表明该方法精密度良好。

2.2.3 重复性 精密称取金线草药材粗粉共6份，每份1.0 g，按照“1.3.3”项下方法制备金线草样品溶液，分别精密吸取样品溶液10μL，按照“1.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，芦丁、槲皮素、山奈酚的RSD分别为2.12%、1.45%和2.06%，表明该方法重复性良好。

2.2.4 稳定性 精密称取金线草药材粗粉1.0 g，按照“1.3.3”项下方法制备成样品溶液，精密吸取样品溶液10μL，分别在0、3、6、9、12、24 h后于上述色谱条件下进样，芦丁、槲皮素、山奈酚的RSD分别为1.28%、1.96%和1.52%，表明样品在24 h内稳定。

2.2.5 加样回收率 精密称取金线草药材粗粉6份，每份0.5 g，并加入适量的芦丁对照品、槲皮素对照品、山奈酚对照品，各待测成分平均回收率（n=6）分 别 为98.42%、101.21%、97.92%；RSD分 别 为1.90%、2.78%、2.35%，表明该测定方法测定结果准确、可靠。

2.3 含量测定结果

精密称取3份金线草药材样品1.0 g，按照“1.3.3”项下方法制备金线草药材样品溶液，按照“1.3.1”项下色谱条件进行测定、计算，按照外标一点法计算药材样品中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量（每个样品重复进样3次，取平均值），结果见表1。

表1 广西靖西市产金线草中3种黄酮成分的含量（n=3）（单位：mg/g）

3 小结

通过对样品制备方法、展开剂等因素的考察，对金线草药材中芦丁、槲皮素、山奈酚成分薄层鉴别进行了分析，表明该方法具有较好的分离效果，样品与对照品的斑点均较易检出，且具有良好的重现性。运用高效液相色谱法测定金线草中芦丁、槲皮素、山奈酚的含量，操作简单、准确可靠，可作为金线草药材质量控制、资源评价等工作的参考。