钱 灿 ，侯卓妮 ，李宏法 ，梁宗锁 *，童建全

（1.浙江理工大学 生命科学与医药学院，浙江 杭州 310018；2.浙江省植物次生代谢调控重点实验室，浙江 杭州 310018；3.淳安汉广中药材初加工有限公司，浙江 杭州 311703；4.淳安县农业局中药材管理站，浙江 杭州 311799）

近年来，随着药用植物消费量的增加，许多野生资源现已濒临灭绝。药用植物作为大健康产业发展的基础，其质量的优劣和安全直接影响着下游系列产品的质量，只有保证药材的品质，才能确保药品的疗效[1-3]。

覆盆子药材是蔷薇科植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的干燥果实，为药食同源，使用历史悠久。现代药理学表明，覆盆子具有显著的抗肿瘤、抗氧化、降血糖血脂、抗衰老、抗血栓、抗阿尔茨海默病、改善肾脏等作用。在临床上常用于遗尿尿频、遗精滑精和阳痿早泄等疾病的治疗[4-8]。覆盆子中的主要化学成分有二萜（苷）、三萜（苷）、黄酮（苷）、甾体、香豆素类、酚酸类等。其中鞣花酸是《中华人民共和国药典》（2020版，一部）中药覆盆子中判别质量的成分之一，鞣花酸具有抗肿瘤[9-14]、抗氧化、抗过敏、消炎抑菌、调节雌激素分泌和抗纤维化等多种生物学活性[15-19]，其含量是衡量覆盆子药材质量优劣的重要指标。

目前，关于覆盆子的研究主要集中在资源调查、种源分化、成分分离、质量控制及药理作用[20-28]方面，对覆盆子果实分级分类以及生长环境对覆盆子鞣花酸含量的影响仍不清楚。本研究通过对不同生长海拔高度、采收时间下获得的相同种源的覆盆子样品进行分级分类和鞣花酸含量差异分析，为寻找影响覆盆子中鞣花酸含量积累的因素提供有力依据。

1 材料与试药

1.1 仪器

Waters ACQUITYTMUPLC超高效液相色谱仪；Waters ACQUITYTMUPLC BEH C18液相色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；Sartorius BT25S 电子天平；电热恒温水浴锅；LG-01高速中药粉碎机。

1.2 试剂

鞣花酸对照品购自上海源叶生物科技有限公司（批号为 S24D11G135548，纯度≥98%），甲醇、乙腈、甲酸（分析纯）。

1.3 药材

覆盆子果实药材样品均为2021年在浙江汉广集团覆盆子种植基地采摘，经浙江理工大学生命科学与医药学院梁宗锁教授鉴定为蔷薇科植物掌叶覆盆子的干燥果实，具体见表1、表2。

表1 覆盆子药材样品

表2 覆盆子药材批号

2 方法

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备

取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含5 μg的溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取覆盆子粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定重量。水浴锅60℃加热回流1 h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，置5 mL量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 鞣花酸色谱条件

柱温 35℃；流速 0.4 mL/min；进样量 5.0 μL；检测波长254 nm；流动相为0.1%A甲酸溶液-B乙腈溶液（0～2 min，94%→94%A；2～3 min，94%→84%A；3～8 min，84%→80%A；8～10 min，80%→94%A）。

理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。色谱图如图1、图2所示。

图1 鞣花酸标准品色谱图

图2 覆盆子样品色谱图

2.3 标准曲线绘制

用鞣花酸对照品配制成 5.0 μg/mL、7.0 μg/mL、10.0 μg/mL、12.0 μg/mL 和 14.0 μg/mL 的标准溶液，采用超高效液相色谱法测定，进样量5 μL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，鞣花酸质量浓度（μg/mL）为横坐标进行回归，绘制鞣花酸含量的标准曲线和回归方程，得到回归方程为y=101 402x-102 299，R2=0.999 2。

2.4 样品分析

精密称取覆盆子样品粉末，测定并计算覆盆子中鞣花酸含量。

3 结果与分析

3.1 覆盆子分级

据《中华人民共和国药典》（2020版）记载，覆盆子为聚合果，由多数小核果聚合而成，呈圆锥形或扁圆锥形。表面黄绿色或淡棕色，顶端钝圆，基部中心凹入。宿萼棕褐色，下有果梗痕。小果易剥落，每个小果呈半月形，背面密被灰白色茸毛，两侧有明显的网纹，腹部有突起的棱线。因此，将覆盆子果实分为果核、果肉、被茸毛3个部位。

市售覆盆子果实直径0.8 cm以上为精品。因此，将覆盆子果实分为覆盆子果实直径0.5～0.8 cm的0.5果和覆盆子果实直径0.8 cm以上的0.8果。

3.1.1 覆盆子果实不同部位对覆盆子鞣花酸含量的影响

鞣花酸在覆盆子中的含量见表3：被茸毛＞果肉＞果核。被茸毛中鞣花酸含量远大于果肉和果核，果肉和果核中鞣花酸含量差别不大。因此，在种植、采收时应重点关注被茸毛的保护。

表3 覆盆子果实不同部位中鞣花酸含量

3.1.2 覆盆子果实大小对覆盆子鞣花酸含量的影响

以浙江省夏同线基地为例，如图3所示。鞣花酸的积累在不同大小的覆盆子果实中是有一定区别的，鞣花酸在果实直径0.5～0.8 cm（0.5）中的含量＞在果实直径0.8cm以上（0.8）中的含量。果实变大过程中糖分的积累增加，从而使酸性物质减少。因此，采收时应挑选直径0.5～0.8 cm的果实，并不是果实越大越为精品。

图3 覆盆子不同果实直径的鞣花酸含量

3.2 覆盆子采收时间对覆盆子鞣花酸含量的影响

以浙江省龙岭塘基地0.5果为例，如图4所示。鞣花酸的积累在采收时间早晚期是有一定区别的。覆盆子药材应以灰绿色和黄绿色为主，红棕色越少越好，红棕色通常为近成熟果实，这种颜色果实也容易霉变或变质。在4-5月采收期内，采收期早期优于晚期，4月末之后鞣花酸含量会逐渐降低。因此，建议应在4月中旬覆盆子果实酸涩时尽早采摘。

图4 覆盆子不同采收时间的鞣花酸含量

3.3 覆盆子生长海拔对覆盆子鞣花酸含量的影响

以浙江省基地各海拔高度为例，如图5所示。鞣花酸的积累在海拔高与海拔低地区是有一定区别的，高海拔地区的覆盆子鞣花酸含量高。因此，覆盆子栽培时应选择海拔高的地区进行种植。

图5 覆盆子不同生长海拔高度的鞣花酸含量

4 讨论与总结

覆盆子在浙江省内多地均为主导产业，姚鑫等[29]确定了浙江省掌叶覆盆子青果具有较大的单株种质选择的潜力；毛菊华等[30]分析了华东覆盆子不同药用部位果实、根、残茎的化学成分含量；付彩群等[31]发现了浙江产覆盆子的鞣花酸含量显著高于江西产，不同采收期的覆盆子青果的鞣花酸比黄果高，不同种植条件下向阳与背阳覆盆子中鞣花酸含量差异相对较小，但是对覆盆子被茸毛部位、果实大小、生长海拔、具体采收时间以及浙江具体种植地方面的研究尚少。故本研究对浙江省内不同覆盆子果实部位、大小，不同生长海拔和具体采收时间下的覆盆子鞣花酸含量进行UPLC测定，能够快速准确地进行指标成分测定。

研究发现覆盆子中鞣花酸含量在被茸毛上积累较多，并非集中在果肉果核上，且果实直径为0.5～0.8 cm的覆盆子中鞣花酸含量高，并非市售认定的果实越大越为精品。在浙江省不同的种植基地中，生长海拔高约为630 m、生长采收期在4月中旬采摘的覆盆子中鞣花酸含量高。因此，在覆盆子种植时应选择高生长海拔，采收时应注重被茸毛的保护，果实直径控制在0.5～0.8 cm，于4月中旬尽早采摘。

研究建立了鞣花酸含量和覆盆子果实部位、果实大小、生长海拔高度和生长采收时间之间的联系，从而为建立系统性种植及采收方法并解决产业发展技术瓶颈奠定基础。