叶青萍，任建敏，丁卉(丽水市中心医院检验科，浙江丽水323000)

长奈瑟菌(Neisseriaelongata)属于奈瑟菌属。奈瑟菌属细菌主要寄居于人或动物的口咽、鼻咽、胃肠道及泌尿生殖道等部位，人源性奈瑟菌除淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌被认为是致病菌外[1]，其他大部分奈瑟菌(包括长奈瑟菌)被认为是健康人群口咽部的定植菌，通常不致病。由长奈瑟菌引起的感染在国内鲜有报道，仅有的几例报道中以引起感染性心内膜炎多见[2-3]。现我院从1例胆道感染患者的血培养中分离到该菌，报道如下。

1 病例摘要

患者，男，57岁，因“肝癌术后一年半，发热3 d”于2021年6月13日收住丽水市中心医院。患者1年余前诊断为肝癌，曾多次入院治疗。本次入院3 d前患者无明显诱因下出现发热，自述最高体温39 ℃，自行使用吲哚美锌栓退热治疗后体温好转。1 d前再次发热，遂至我院急诊就诊，床边心脏超声示：左室扩大，主动脉瓣轻-中度关闭不全，二尖瓣轻度关闭不全。心肺听诊无殊。血液检查示：快速超敏C反应蛋白100.79 mg/L，白细胞10.5×109/L，中性粒细胞比例77.4%，淋巴细胞比例8.2%，红细胞3.07×1012/L，血红蛋白96 g/L，降钙素原2.05 ng/mL，凝血酶原时间13.0 s，国际标准化比率1.20，凝血酶时间16.8 s，D-二聚体1.07 mg/L，总胆红素56.9 μmol/L，肌酸激酶<20 U/L，CK同工酶18 U/L，乳酸脱氢酶288 U/L，尿素9.3 mmol/L，拟“脓毒血症、肝恶性肿瘤”收住入院。6月13日于我院急诊送检血培养，15 h后陆续有3瓶血培养报阳，经质谱鉴定为长奈瑟菌(Neisseriaelongata)。予氧头孢烯类拉氧头孢针静滴、喹诺酮类莫西沙星口服抗感染,治疗后体温正常，C反应蛋白、降钙素原等感染指标较前好转,考虑抗感染治疗有效。本案例中的患者为恶性肿瘤末期，全身情况欠佳，在体温控制正常之后，临床主要予对症支持姑息治疗，改善症状，缓解痛苦。

2 细菌鉴定

2.1细菌培养及鉴定 分别采集患者双侧2套血培养送检，血培养采用VIRTUO全自动微生物培养系统进行，14 h 22 min后左侧厌氧瓶报阳，14 h 45 min后右侧厌氧瓶报阳，17 h后左侧需氧瓶报阳。取阳性瓶内菌悬液直接涂片革兰染色(珠海贝索公司)，镜下可见革兰阴性杆菌，转种于哥伦比亚血琼脂平板和巧克力琼脂平板(温州康泰公司)，置35 ℃、5%CO2培养箱培养24 h后，在血平板和巧克力平板上生长良好，呈1～2 mm、淡黄色、圆形、湿润、凸起的菌落(见图1)，纯培养物涂片呈阴性球杆菌。触酶阴性，氧化酶阳性。3瓶阳性报警瓶转种后的纯培养物经法国生物梅里埃Vitek MS质谱仪鉴定均为长奈瑟菌(Neisseriaelongata)，置信度均为99.9%。将血平板及巧克力平板继续温育3～4 d后，呈现典型的奈瑟菌属细菌的菌落形态(见图2)。

图1 35 ℃、5%CO2培养24 h菌落形态(左：血平板；右：巧克力平板)

图2 35 ℃、5%CO2培养4 d菌落形态(左：血平板；右：巧克力平板)

2.2分子生物学方法 将细菌送至杭州金域医学检验所有限公司利用IonPGM个人化操作基因组测序仪进行测序，其方法为检测16S rDNA V2、V3、V4、V6、V7、V8、V9可变区，得出的序列号经BLAST比对,显示相似度最高的为NO.NR_104944.1，百分比为99.66%，第二NO.NR_025893.1为99.33%，第三NO.NR_028900.1为96.63%，前两名均为Neisseriaelongata。

3 讨论

本例患者为中老年男性，肝癌术后1年半，期间进行了多次手术及术后化疗等诊疗措施。患者于2021年4月15日曾行“胆管支架植入术”，术前、术后反复发热，血培养曾提示阴沟肠杆菌感染，诊断“胆道感染，败血症”，此次因发热入院，在急诊室就诊时予以双侧双瓶送检血培养，在4瓶中出现3瓶阳性，鉴定结果均为长奈瑟菌(Neisseriaelongata)，同时血液中降钙素原、CRP等感染指标均提示升高，可以排除污染可能。

关于长奈瑟菌引起的感染国内报道极少，同时奈瑟菌属一般被认为是健康人群口咽部及鼻咽部的正常菌群，很少引起感染，主要见于牙科手术及介入性心血管操作后[2]。本例患者在发病前并未发现有相关的介入性操作，其感染途径及机制尚不明确。可能与床边心脏超声中提示的主动脉瓣及二尖瓣关闭不全有关，已知心脏瓣膜病是感染性心内膜炎的主要发病因素之一，且该患者为肝癌术后，多次接受化疗，免疫功能低下。

奈瑟菌属细菌镜下形态大多为直径不超过2 μm的球菌，单个或成双排列。但长奈瑟菌为短杆状[4]，本例患者血培养直接涂片表现为革兰阴性杆菌，在血平板及巧克力平板上生长良好，转种后纯培养物涂片呈阴性球杆菌。直接通过Vitek MS质谱仪鉴定为长奈瑟菌(Neisseriaelongata)，由于其形态与属内其他菌种相差较大，笔者再次通过质谱仪进行复查，结果与首次一致，置信度均为99.9%。触酶阴性，氧化酶阳性，这与参考资料描述一致[1]。最终利用16S rRNA分子生物学方法鉴定，结果亦为长奈瑟菌(Neisseriaelongata)。奈瑟菌属细菌一般为专性需氧菌，而该患者首先阳性报警的是厌氧瓶，经分析可能有以下几点原因。首先，本实验室采用的是生物梅里埃公司提供的普通型厌氧瓶，达不到完全的厌氧环境，但是其营养成分要比需氧瓶更好一些，通过查阅本实验室过去2年间报阳的其他专性需氧菌(如铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌)的生长情况，也一样存在厌氧瓶先报阳的情况；其次，该患者首先报阳的厌氧瓶血量充足，而4瓶里最终没有报阳的那瓶血量只有1 mL，笔者认为这也是需要考虑的一部分原因，同时也应该引起采血人员的注意，在平时的工作中要注意足量规范采血。

本案例报道的长奈瑟菌引起败血症，基本可以明确，关于是否引起感染性心内膜炎尚没有明确的临床证据证明，但是也应该引起注意。由于该细菌比较少见，使用一般的生化反应鉴定容易误检为其他细菌，若是临床送检为单套血培养，极易被当成污染菌而漏检，由于本院已经施行双侧双瓶送检，并且引进了Vitek MS质谱仪，才最终得以正确的鉴定。由于长奈瑟菌引起感染的病例报道较少，对该菌的认识尚浅，也没有相关的药敏试验方法推荐。患者入院后临床予氧头孢烯类拉氧头孢针2 g q12 h静滴、喹诺酮类莫西沙星0.4 g qd口服抗感染，抗感染治疗后体温恢复正常，考虑抗感染治疗有效，故在收到实验室阳性结果后仍考虑继续当前治疗。

综上所述，临床微生物实验室工作人员应该对长奈瑟菌引起一定的重视，提高该菌的鉴定准确性，并进一步研究完善其相关资料，为以后的预防、诊治提供依据。同时应该提倡临床及时规范送检血培养，按标准进行足量采血，做到双侧双瓶送检，而微生物实验室工作人员也应该加强与临床的及时有效沟通，在遇到一些少见的细菌时更应如此。本病例中长奈瑟菌的及时准确鉴定依赖于质谱技术的引进，表明质谱技术的普及对临床疑难菌和少见菌的快速鉴定有重大意义，可为临床及时诊治提供可靠的依据。