刘文竹，胡 欣，江 伟，左秀静，朱华军

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV) 是造成慢性肝病的重要病原微生物。HCV感染往往难以引发适当的固有免疫应答，因而导致约80%感染者转为慢性感染，其中部分患者继而发展为HCV 感染相关性肝硬化，甚至肝癌[1，2]。小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier，SUMO)化修饰是一个高度动态的翻译后修饰过程，广泛参与细胞周期调节、基因表达、信号转导和维持基因组稳定等过程[3]。与此同时，SUMO特异性蛋白酶家族(SUMO-specific protease，SENP)的去SUMO化功能发挥动态调节作用，其中SENP3可通过解偶联SUMO2和SUMO3，促进癌细胞转移、细胞增殖或凋亡，并作为感染、缺氧等多种应激的传感器[4]。近年来，研究显示脂滴对于HCV的复制具有关键性作用，而SENP3是细胞内脂质代谢调节的重要分子，但SENP3在HCV复制过程中扮演的角色尚不明确[5]。本研究初步探究了SENP3对HepG2细胞脂滴水平和HCV复制的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 HepG2 细胞和感染性HCV 病毒颗粒( cell-culture-derived infectious HCV，HCVcc) 由安徽医科大学安徽病原生物学省级实验室保存。DMEM 基础细胞培养基、胎牛血清购自美国GIBCO 公司；Lipofectamine© RNAiMAX试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；油红O、棕榈酸和油酸购自美国Sigma公司；Trizol RNA提取试剂盒购自Takara公司；实时定量PCR试剂盒购自天根生化科技(北京) 有限公司；抗HCV核心蛋白单克隆抗体、抗SENP3蛋白单克隆抗体和抗GAPDH多克隆抗体购于Cell Signaling公司。HCV RNA、内参GAPDH qRT-PCR引物和SENP3-siRNA 寡核苷酸均由吉玛基因公司合成。HCV RNA引物序列：5′-CTGTCTTCACGCAGAAAGCG-3′，3′- TCGCAACCCAACGCTACTCG-5′；GAPDH引物序列：5′-TGTGGGCATCAATGGATTTGG-3′，3′-ACACCATGTATTCCGGGTCAAT-5′；SENP3-siRNA 寡核苷酸序列：5′-GGGCUGGAAAGGUUACUUCdTdT-3′，3′-dTdTCCCGACCUUUCCAAUGAAG-5′。

1.2 HCV感染HepG2细胞 取对数生长期的HepG2细胞，消化后以1×105个/孔的密度接种于24孔细胞培养板，采用添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和10 μg/ml链霉素的DMEM完全培养基，于37 ℃、饱和湿度、5% CO2条件下培养24 h。……