张 梅

(天津市静海区医院感染疾病科，天津 301600)

据WHO流行病学数据显示,全球约有2亿人曾经感染过乙型肝炎病毒(HBV),且每年大约有60万人死于HBV感染所致相关疾病[1-2]。我国是HBV感染大国,区域性流行病学研究显示,我国HBsAg阳性携带者高达1亿以上[3]。近年来研究显示,不同地区乙型肝炎病毒不同感染类型存在一定的差异,并与感染后患者疾病的转归存在一定的关系[4-5]。HBV感染后,由于病毒编码的一种蛋白质HBV的直接作用以及由于细胞内活性氧(ROS)的大量增加而引起的间接变化,导致肝细胞改变。HBV通过与基因组DNA结合,改变miRNAs的表达模式,影响组蛋白甲基转移酶,结合SIRT1蛋白激活转录,与组蛋白甲基化酶和去甲基化酶协同改变细胞表达模式,部分导致调控失调[6-7]。慢性HBV感染时,细胞内ROS增加了1000倍。ROS增加的部分原因是HBV定位于线粒体,在线粒体中HBV降低线粒体膜电位。HBV感染后ROS的增加引起炎性反应,从而导致ROS的进一步增加。ROS引起20多种类型的DNA损伤。氧化性DNA损伤是致突变的。此外,DNA损伤的修复可在DNA修复过程中引起损伤部位的表观遗传改变。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取我院诊治的HBV感染者98例为研究对象,留取患者的血清标本进行HBV基因型检测。98例HBV感染者中男66例,女32例,年龄19～79岁,平均(54.3±19.6)岁,其中无症状携带者10例,慢性乙型肝炎患者77例,肝硬化者6例,肝细胞癌者5例。98例患者均符合全国第十次病毒性肝炎会议修订的“病毒性肝炎防治方案”的标准及2005 年《慢性乙型肝炎防治指南》标准,且临床确诊HBV DNA阳性。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2试剂与仪器:DNA提取试剂盒,Qiagene DNA blood minikit(50T),购自德国QIAGENE公司；DNA聚合酶,购自日本Takara公司；dNTP,购自日本Takara公司；引物序列合成由华大基因公司完成。台式微型离心机,购自BechmanCoulter公司；多功能PCR仪(DNA Engine),购自美国BIO-RAD公司。

1.3基因型检测：按照试剂盒说明提取患者血清HBV DNA,根据文献报道[4,8]进行PCR反应,并根据扩增片段大小与阳性标准品做对照,判断HBV基因型。

1.4统计学分析：统计学分析采用STATA12.0软件进行,基因型等计数资料采用n(%)表示,组间比较采用χ2检验,P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1HBV基因型：98例患者中乙型肝炎病毒B型37例(37.8%),C型45例(45.9%),B型+C型混合感染型16例(16.3%),混合型显著低于B型和C型,具体亚型分布频率：B型37例(37.8%)：其中Ba型23例(23.5%)，Bj型8例，非Ba/Bj型6例(6.1%)；C型 45例(45.9%)：其中C1型3例(3.1%)，C2型25例(25.5%)，非C1/C2型17例(17.3%)；B+C型16例(16.3%)：其中Ba+C1型1例(1.0%)，Bj+C2型1例(1.0%)，Ba+C2型3例(3.1%)，Bj+C2型4例(4.1%)，Ba型+非C1/C2型4例(4.1%)，Bj型+非Cl/C2型1例(1.0%)，非Ba型/Bj+C1型0例(0.0%)，非Ba/Bj型+C2型0例(0.0%)，非Ba/Bj型+非Cl/C2型2例(2.0%)。见图1。

图1 98例患者中乙型肝炎病毒分型分布频率

2.2不同类型HBV感染者基因型分布：无症状携带者以B型感染为主,慢性乙型肝炎以B型和C型为主,肝硬化及肝癌以C型为主,不同类型HBV感染者基因型分布频率差异存在统计学意义(P<0.05)。见表1，见图2。

表1 不同类型HBV感染者基因型分布[n(%)]

图2 不同类型HBV感染者基因型分布柱状图

3 讨论

乙型肝炎病毒感染人体细胞后在人体内不断复制增殖,是造成肝功能异常、肝硬化、甚至肝癌的重要原因。近年来的分子流行病学研究显示,人群感染HBV后可出现不同的转归,部分人群为无症状携带者,部分人群发展为慢性乙型肝炎、但有的人群感染后发生肝硬化甚至肝癌[9]。已有研究证实,不同的乙型肝炎转归可能与患者感染的HBV基因型有关[10]。根据HBV全基因组序列差异≥8%或S基因序列≥4%,可将HBV 分为A型到H型,8个基因型。不同基因型又可进一步分为不同亚型。既往的研究表明,HBV基因型具有较为明显的地理分布特点和人种的特异性,HBV基因型与感染途径、感染谱、疾病进展有一定相关性[11-12]。李雅娟等[4]采用基因型和亚型特异性引物聚合酶链反应6个城市400多份HBV感染者血清进行基因型及亚型分析,认为HBV各型感染存在明显差异。研究提示,上述6个城市HBV感染者中,以B2和C2亚型占优势,C基因型可能与肝硬化和肝细胞癌的发生有关。徐素仿等[8]研究认为合肥地区HBV感染者中以Ba和C2亚型占优势,C基因型可能与肝硬化和肝细胞癌的发生有关。从上述来自不同地区的研究样本可以看出,HBV感染基因型存在一定的地区差异及人群特征。

本研究对天津市静海地区98例HBV感染者的血清HBV基因分型进行了研究,探讨该地区HBV感染患者病毒基因型分子流行病学情况,为该地区的乙型肝炎诊治提供一定的参考。研究发现,该地区乙型肝炎病毒以B型(37.8%)和C型 (45.9%)为主。肝硬化及肝癌患者中C型比例最高。研究提示,天津市静海地区乙型肝炎病毒感染以B型和C型为主,C型感染可能是本地区HBV感染患者肝硬化及肝癌的高危因素。因此，对于HBV C型感染患者应引起医务人员的重视,此类感染人群更易发展为肝硬化和肝癌。