王旭荣 张北宁 刘娜娜

(1.西安市第一医院儿科，陕西 西安 710001；2.榆林市中医医院内科，陕西 榆林 719000)

支气管哮喘是儿童常见呼吸系统疾病之一，患儿主要以慢性炎性反应以及气道高反应性为特征[1]。研究[2]显示，未予以特异性干预手段的支气管哮喘患儿，病情容易进展为肺心病，对其生活质量造成严重影响。血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因是目前为止发现的与哮喘有关的易感基因，国内相关性报道较少[2]。本文主要探讨支气管哮喘患儿血清免疫球蛋白(IgE)、呼出气一氧化氮(FeNO)水平与ORMDL3基因单核苷酸多态性的相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择2017年3月至2018年2月我院收治的支气管哮喘患儿185例作为研究对象，患儿随访时间均在1年以上，患儿临床治疗以及临床资料的使用均取得监护人的同意，并签署知情同意书。根据患儿有无高危因素(是否合并过敏性疾病或父母哮喘病史等)将其分为非特应性哮喘组(n=59)和特应性哮喘组(n=126)。特应性哮喘组纳入标准：(1)患儿年龄3～12岁；(2)根据《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[3]相关诊断标准，喘息次数>2次/6个月或3次/年；(3)患儿存在过敏性鼻炎、变应性皮炎等过敏性疾病，父母有一方存在哮喘史；(4)患儿监护人均知情同意。非特应性哮喘组纳入标准：(1)患儿年龄3～12岁；(2)根据《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》相关诊断标准，喘息次数>2次/6个月或3次/年；(3)患儿无过敏性鼻炎、变应性皮炎等过敏性疾病，父母未存在哮喘史；(4)患儿监护人均知情同意。排除标准：(1)合并先天性支气管或肺部发育异常、气管内阻塞、支气管扩张、肺结核或先天性心脏病等；(2)近期合并其他病原体而引发的呼吸道感染患儿。

1.2方法 抽取患儿清晨空腹静脉血，将其置于含有肝素抗凝剂的离心管中，摇匀、离心后分离血清，置于-20℃冰箱内保存。采用酶联免疫吸附法检测患儿血清IgE水平，检测试剂盒购于福建迈新公司，检测严格参照试剂盒使用说明书。采用Niox Mino eNO分析仪检测患儿FeNO水平，取坐位，对身高<130 cm或年龄<10岁的儿童，6 s为参考呼出时间，呼出中期的2～3 s为测试平台，每例患儿测试1次。采用无菌采血管抽取患儿外周静脉血，将其置于EDTA-K2抗凝试管中充分摇匀，然后置于-80℃冰箱内保存备用。采用天根生化科技(北京)有限公司生产的TGuide S32自动核酸提取仪按照说明书进行全血基因DNA提取。引物设计参照美国国立生物技术信号中心(NCBI)官方网站的GenBank中序列(rs7216389)，使用生物软件Premier5.0设计，由上海生工生物技术有限公司合成印务，上游引物：GGTGGCAACTGACTCAGAAC，下游引物：CAACCTGGCCAACATGGTGA。PCR扩增反应体系：1.0 μL Forward primer(5 μm)，1.0 μL Reverse primer(5 μm)，2.0 μL DNA模板，12.5 μL dNTP Mixture，8.5 μL ddH2O。扩增条件：94℃ 5 min，94℃ 30 sec，1个循环；55℃ 30 sec，72℃ 30 sec，72℃ 5 min，4℃ 恒温，5个循环。

2 结 果

2.1血清IgE、FeNO水平 特应性哮喘组患儿血清IgE、FeNO水平分别为(27.81±3.34)×10-9、(217.48±56.39)IU/mL，显著高于非特应性哮喘组的(10.25±2.12)×10-9、(125.73±37.53)IU/mL，两组比较差异显著(t=37.014、11.366，P均<0.05)。

2.2ORMDL3基因rs7216389位点基因多态性分布 两组基因型及等位基因频率比较差异具有统计学意义(χ2=2.977、7.913，P<0.05)。见表1。

表1 两组患儿ORMDL3基因rs7216389位点基因多态性分布

2.3不同ORMDL3基因型患儿血清IgE、FeNO水平比较 两组不同ORMDL3基因型患儿血清IgE、FeNO水平差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组不同ORMDL3基因型患儿血清IgE、FeNO水平比较

3 讨 论

哮喘作为一种多基因遗传性疾病，其遗传率可达到36～79%。在ORMDL3基因与儿童哮喘的相关研究已有报道，研究认为，ORMDL3 rs7216389位点多态性与儿童罹患哮喘的风险密切相关[4-5]。本研究结果显示，非特应性哮喘组TT、TC、CC三种基因频率分别为76.27%、15.25%、8.47%，MP非哮喘组TT、TC、CC三种基因频率分别为50.79%、38.89%、10.32%，A、G等位基因频率分别为83.90%、16.10%，特应性哮喘组T、C等位基因频率分别为70.24%、29.76%。两组基因型及等位基因频率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。与学者报道结果相似[6]，提示TT基因型以及T等位基因表达使患儿进展成为哮喘具有着更高的风险，而CC基因型可能是相关保护因素。

IgE是哮喘特应性体质的标志，属于一种免疫球蛋白，可诱发I型变态反应，导致患儿出现可逆的气管阻塞，从而诱导哮喘发作[7]。研究[8]结果显示，支气管哮喘患儿可导致IgE水平的升高，而IgE既可以作为感染源，同时也是特异的过敏原。支气管哮喘患儿具有更高水平的促炎细胞因子，导致机体总IgE水平的升高。本研究结果显示，特应性哮喘组患儿血清IgE、FeNO水平显著高于非特应性哮喘组(P<0.05)，提示特应性哮喘患儿血清IgE、FeNO水平明显高于非特应性哮喘患儿。此外非特应性哮喘组和特应性哮喘组患儿不同ORMDL3基因型患儿血清IgE、FeNO水平差异均无统计学意义，表明不同基因型对患儿血清ET-1、IgE水平无明显影响，但是考虑到本研究纳入样本量较小，缺乏大样本研究分析，提示进一步研究还需要扩大样本量，以获得更为准确的研究结果。