肉斯旦·图尔迪 伊不拉音·西力甫 雷 程 刘 林 帕尔哈提·沙依木③

（乌鲁木齐市友谊医院普外科，乌鲁木齐830000）

结肠癌为临床常见消化道恶性肿瘤，发病率呈上升趋势。近50%结肠癌患者有远处转移和复发，预后较差，复发后患者中位生存期仅为13.3个月［1］。转移是一个复杂的过程，研究已证实其与上皮-间质转化密切相关［2］。因此，探究结肠癌的潜在转移机制对抑制结肠癌转移意义重大。miRNA 为内源性非编码小分子RNA，负调控靶基因，可作为抑癌基因或促癌基因发挥作用［3］。大量miRNA 在不同病理状态下异常表达，且miRNA 与多种恶性肿瘤发生进展有关［4-5］。miR-377 在多种肿瘤中异常表达，可抑制肿瘤增殖、迁移和侵袭［6-7］。近年已有关于miR-377-3p 在大肠癌中表达的研究报道，发现其可作为癌基因发挥促癌作用［8］。miR-377 的生物学功能及其在结肠癌中的作用机制尚不清楚。因此，本研究拟探讨miR-377 对结肠癌迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI1640 培养基购自瑞士Lonza 公司（Lot.No.20190802，Cat#G1063）；胎牛血清购自美国Gibco 公司；miR-377 mimic、inhibitor 及阴性对照物由苏州吉玛基因股份有限公司合成；Lipofectamine2000 转染试剂盒、Trizol 试剂、pcDNA4.1-ZEB2质粒购自Invitrogen 公司；pmirGLO-wt-ZEB2、pmir‑GLO-mut-ZEB2荧光素酶报告载体购自美国Promega公司；反转录试剂盒和FastStart Universal SYBR Green Master 试剂盒购自Roche 公司；miRNA 提取分离试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；双荧光素酶报告检测系统购自美国Promega公司；ZEB2、ALDH1、CD133、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、GAPDH 抗体及HRP 标记的二抗均购自美国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与转染 结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620、HCT116和人小肠上皮细胞HIEC 均购自中国科学院，采用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培 养 基 于37 ℃、5%CO2培 养。……