苏俐丹 何迎春 黄立中 刘 洁

（湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室，长沙410208）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，发病率为头颈部恶性肿瘤之首，目前治疗以放疗为主辅以化疗和手术治疗，但存在手术难度大、术后易复发转移、放疗后不良反应严重等问题，因此，需寻找更有效且毒副作用小的药物用于NPC 治疗［1-2］。血根碱（san‑guinarine，SAN）是来源于白屈菜及博落回等罂粟科植物的苯并菲啶类生物碱，有抗菌、消炎、杀虫等多种药理作用，并具有抗肿瘤作用［3-4］。研究发现，SAN 可诱导肿瘤细胞自噬，但尚无关于SAN 对NPC细胞增殖及自噬影响的文献。SAN 可抑制NPC 细胞增殖并诱导细胞凋亡，本研究观察了SAN 对NPC细胞增殖及自噬的影响，探讨增殖与自噬的关系，并从AMPK 信号通路研究其作用机制，为SAN 治疗NPC提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料 人NPC 细胞株5-8F 购自北京北纳创联生物科技有限公司（批号：BNCC341932）；SAN（纯度≥98%）购自上海源叶科技生物有限公司（批号：2447-54-3），称取SAN 粉末20 mg，二甲基亚砜溶解，制成200 mmol/L 母液，-20 ℃避光保存，临用前用RPMI1640 完全培养液稀释；顺铂（cisplatin，上海源叶生物科技有限公司，批号：B24462）；RPMI1640 培养基（美国HyClone 公司，批号：SH30809.01B）；2.5 g/L 胰蛋白酶-EDTA 消化液（北京索莱宝公司，批号：T1320）；胎牛血清（美国Gibco 公司，批号：10099-141）；MTT（碧云天生物科技有限公司，批号：ST316）；3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）、雷帕霉素（rapamycin）、AMPK抑制剂Compound C（MCE公 司，批 号：HY-19312-57232、HY-10219-61925、HY-13418-40374）；单丹磺酰戊二胺（MDC，北京索莱宝公司，批号：G0170）；BCA 蛋白定量试剂盒、凝胶配制试剂盒（康为世纪公司，批号：CW0014S-500T、CW0022S）；anti-β-actin、anti-PCNA、LC3、Beclin-1、p62、AMPK、p-AMPK、mTOR（CST，批 号：4970、13110、4108、3495、23214、5831、2535、2983，1：1 000稀释）；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔（CST，批号：75952）；贺利氏HERA cell 150i CO2培养箱（赛默飞世尔公司）；……