陈良胜 殷双兴

河南省新县人民医院药剂科，河南 新县 465550

柴胡历史悠久，为伞形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC.)或狭叶柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根。柴胡皂苷类为其主要活性成分，其中，以柴胡皂苷a、d的药理作用最强。因此，本文主要对道地柴胡药材有效成分指纹图谱的研究进展进行综述，并进行鉴别、检查、含量测定、重金属检查和农药残留检测，旨在为全面控制柴胡药材的质量提供重要依据。

1 柴胡临床使用的现状

柴胡属药用植物在我国分布广泛，品种较多，在不同区域都被当地在临床上当作柴胡使用，药用的有效性和安全性较差。本文对长江上游和大别山柴胡属药用植物进行实地考查和大量历史文献汇总和分析。认定原植物为同属植物4种民间药用柴胡，在本地都有使用，都曾经有被当作药用的历史。我国野生柴胡属中药资源藏量巨大。由于我国药典并未收录有关区域性柴胡的内容，缺乏相关的质量标准，造成长江上游和大别山区域性柴胡质量难以得到有效控制。而民间又有大量的实际应用，给当地老百姓用药带来严重的安全隐患。因此，采用科学的方法建立区域性柴胡的质量标准，分析长江上游和大别山区四种柴胡属植物的化学成分，测定其有效成分的含量，为当地柴胡的推广应用提供理论依据，发展库区中药材具有现实的经济意义，也是现实的客观需要。

正品柴胡为常用中草药，野生资源正在枯竭，在推广人工种植的同时，适时研发新的柴胡属植物替用品，扩大野生资源的来源，也是目前比较现实的选择。随着柴胡资源日渐紧张，市场价格不断攀升，各地都在积极探索，开发当地柴胡属的野生资源，试图缓解供量的紧张。长江上游和大别山区是柴胡产量较大，是全国的主产区之一，品种混用极其混乱严重。质量无法控制，用药隐患大。

2 柴胡的分类

柴胡(Bupleuri)是伞形科植物中的大属之一，全世界有200种左右。我国有柴胡属植物40种、17变种、7变型，主要分布于西南、西北和东北地区[1]。本属入药种类约20种，主要的有柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)、狭叶柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)、银州柴胡(Bupleuri.yinchowenseShanet Y. Li)和黑柴胡(Bupleuri.smithiiH.Wolff)等。《中华人民国和国药典》2020版规定柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)和狭叶柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)的干燥根为药用柴胡，按性状不同，分别习称“北柴胡”和“南柴胡”。

3 柴胡的化学成分与药理作用

柴胡的化学成分复杂,主要含皂苷和挥发油,同时也含黄酮、脂肪酸、多元醇、植物甾醇、木脂素、香豆素、多糖、微量元素等类型成分[2-3]。柴胡性味辛、苦，微寒，归肝、胆、肺经，具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的功效，用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛[4]。药理实验[5-6]表明，柴胡具有解热镇痛、保肝、抗病毒、抗抑郁、抗癌、抗溃疡等多种活性。

4 柴胡的指纹图谱研究和安全性检查领域综述

近年来，很多学者对柴胡药用成分和临床应用研究较多，在本草考证、生境分布、原药用植物鉴定以及质量评价等方面作出了大量的贡献。在柴胡分布较多的甘肃、河北、河南、湖北等地区，对野生和家种的柴胡的指纹图谱研究较多，主要采用HPLC、GC-MS以及薄层色谱等方法来研究柴胡中柴胡皂苷和挥发油等有效成分。现将近十年来各地在柴胡品质，主要在指纹图谱研究和安全性检查领域取得的重要进展综述如下。

将北柴胡柴胡皂苷建立高效薄层荧光色谱指纹图谱(如图1所示)，与南柴胡、锥叶柴胡、多枝柴胡、三岛柴胡、西藏柴胡等不同产地柴胡的指纹图谱进行比较。以60目硅胶为原料制备高效薄层板，以CH2Cl2∶EtOAC∶CH3OH∶H2O(30∶40∶15∶3)为流动相，2%对二甲氨基苯甲醛:10%硫酸乙醇液显色后获得薄层荧光色谱指纹图谱，经软件(ChromafingerTM)生成共有模式，发现北柴胡指纹图谱由19个特征荧光条斑组成[7]。

图1 柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究图[7]

有关专家采用山西产地的柴胡和小叶黑柴胡中皂苷类成分HPLC指纹图谱分析方法，采用RP-HPLC测定10个不同来源柴胡样品。建立了HPLC指纹图谱共有模式，并对其进行了相似度比较，为控制柴胡药材的质量提供了理论依据[8-11]。

肖蓉等[12]分别建立了野生北柴胡、栽培北柴胡、狭叶柴胡、锥叶柴胡及线叶柴胡的HPLC指纹图谱(如图2所示)，采用气质联用技术对北柴胡挥发油的有效成分进行了测定和分析。 发现培育出来的北柴胡与野生北柴胡相比，其提取物、皂苷类成分和 HPLC 指纹图谱均无显著差异，但挥发油的含量和成分有一定差异。 因此培育柴胡具有一定的应用前景和经济价值。根据实验结果，北柴胡提取物的含量为15.6%，柴胡皂苷 c、 a、 d 含量分别为0.50%、1.90%和1.73%。南柴胡浸出物含量为25.9%，皂苷c、d含量分别为0.15%、0.29%。市场上的柴胡饮片品种主要为北柴胡，浸出物含量为13.6%，皂苷c、a、d的含量分别为0.41%、1.17%、1.30%。

图2 河北道地药材北柴胡HPLC-UV指纹图谱研究图[12]

汤芳玲等[13]采用Waters BEHTM Cl8色谱柱，以CH3CN∶H2O进行梯度洗脱，0.61 mL· min-1的流速，200 nm作为检测波长，30℃柱温。通过检测20批小叶黑柴胡药材，建立其UPLC指纹图谱(如图3所示)，共发现了28个共有指纹峰，根据聚类分析结果，可将药材质量分为2大类，8个相似度较高的药材分为一类。

图3 UPLC法测定小叶黑柴胡的根中柴胡皂苷a、d含量图[13]

李艳荣等[14]建立同时测定承德产及其他主产区柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量及其HPLC指纹图谱(如图4所示)。方法：色谱柱为ZorbaxSB-C18，乙腈溶液系统梯度洗脱，检测波长 210 nm，流速1.0 mL· min-1，分析时间90 min。得到柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为33.2～531 μg· mL-1(r=0.9999)、31.8～508 μg·mL-1(r=0.9999)；平均回收率分别为98.6%(RSD=0.9%)、98.9%(RSD=1.2%)。15批药材的HPLC指纹图谱共确立6个共有峰。

图4 柴胡的HPLC指纹图谱研究图[14]

王建科等[15]建立了竹叶柴胡药材的HPLC指纹图谱。方法：色谱柱为Agilent Cl8， CH3CN：0.2% H3PO4水溶液为流动相，流速为1.0 mL·min-l，柱温为30 ℃，检测波长为203 nm。得到了竹叶柴胡药材的指纹图谱，确定了共有峰22个，各峰的相似度均>0.800。

王一飞等[16]建立了柴胡药材的高效液相指纹图谱方法(如图5所示)。方法：采用Zorbax SB-C18柱，柱温25 ℃，以流动相CH3CN：0.2% H3PO4水溶液洗脱，检测波长220 nm，流速为1.0 mL·min-l。采用国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件，对9批不同批次的柴胡药材指纹图谱进行相似度计算。得到各批柴胡药材中有11个共有峰，各峰分离度良好，各批次柴胡药材间共有峰的相对保留时间RSD<1.0%，药材间相似度均>90%。

图5 北柴胡药材的HPLC 指纹图谱研究图[16]

孙国祥等[17]用RP-HPLC建立了柴胡HPLC数字化指纹图谱(如图6所示)。方法采用CenturySIL C18色谱柱，流动相为水和乙腈(均含l%醋酸)梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1，265 nm检测，柱温(30～0.15)℃。确定了27个共有峰。通过对指纹峰多种参数评价，建立了柴胡HPLC数字化指纹图谱。各产地药材的化学成分分布比例和含量2个方面与对照指纹图谱间都具有良好相似性。

图6 柴胡高效液相色谱数字化指纹图谱研究图 [17]

王启帅等[18]采用HPLC-ELSD析方法，对柴胡样品进行HPLC指纹图谱研究。分析采用相似性分析、数据聚类分析和主成分分析分析。 结果建立了柴胡药材的HPLC指纹图谱分析方法，共有12个共有峰。

综上所述，随着指纹图谱技术的飞速发展，已广泛应用于对中药质量的研究，逐步取代传统的以单一化学成分的含量来控制药材质量的模糊做法，各地对正品柴胡和道地柴胡品种的质量研究很多，多采用最新的指纹图谱技术，研究发现各地柴胡品种的指纹图谱有所不同，其指纹图谱显示有效成分含量皂苷和挥发油成分多有不同，结合长江上游和大别山区域柴胡的考察，借鉴和运用其他柴胡指纹研究经验，建立地域性柴胡指纹图谱，指导柴胡资源开发意义重大。