黄志林，李次发，吴志武，谢姚屹，黄研菊，岑花桃

（南宁市第三人民医院神经科二区，广西 南宁 530005）

高血压为我国最常见慢性疾病之一，而部分高血压患者伴有高同型半胱氨酸血症，被称为H型高血压。同型半胱氨酸（Hcy）水平升高可促进炎症因子生成、抑制血管内皮修复，最终加重血管内皮损伤，相关研究表明，H型高血压患者颅内外动脉狭窄发生率明显高于非H型高血压患者，从而加大脑梗死的发生风险[1]。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是Hcy再甲基化成为蛋氨酸代谢过程中关键酶，近期有研究指出，MTHFR C677T基因具有多态性，其中TT型纯合突变和T等位基因型可导致Hcy水平升高[2]。但目前国内外对H型高血压脑梗死患者颅内外动脉狭窄程度与MTHFR C677T基因多态性关联的研究较少，故本研究回顾性分析了160例H型高血压脑梗死患者的临床资料，旨在探讨MTHFR C677T基因多态性与患者颅内外动脉狭窄程度的关系，以期为降低脑梗死发生率提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析南宁市第三人民医院2018年4月至2020年1月收治的160例H型高血压脑梗死患者的临床资料，将其作为H型高血压组，并选取同期160例非H型高血压脑梗死患者的临床资料作为参照组。纳入标准：两组患者均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》[3]中的相关诊断标准，且H型高血压组同时符合《H型高血压诊断与治疗专家共识》[4]中的相关诊断标准者；均经全脑血管数字减影血管造影（DSA）检查确诊者；临床资料完整者等。排除标准：合并凝血功能障碍或有出血倾向者；合并恶性肿瘤者；近3个月内有手术史者；存在严重感染性疾病或创伤史者。本研究经南宁市第三人民医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 研究方法

1.2.1 影像学检测所有患者于发病1～3周内均进行常规颈动脉彩超、经颅多普勒超声（TCD）、头颅CT、头颅CT血管成像（CTA）和主动脉弓+DSA检查，并以DSA检查结果为“金标准”。检查前3 h禁饮、禁食，术中监测生命体征。DSA检查具体操作：应用医用血管造影X射线机[西门子（中国）有限公司，型号：Artis zeego Ⅲ]，造影剂选用碘海醇，在1%利多卡因局部麻醉下，以经皮穿刺技术经股动脉穿刺，置入5 F动脉鞘，先后置入5 F猪尾巴导管或Simons导管，分别行主动脉弓、双侧颈总动脉、双侧锁骨下动脉造影，当确定无颅外动脉闭塞、血管开口无明显斑块、颅内动脉有可疑狭窄时，将导管置入双侧颈内动脉和椎动脉内进行多角度造影。参照北美症状性颈动脉实验法[5]计算颅内外动脉狭窄程度，即狭窄度=（D - d）/D×100%（D为原管腔直径，d为狭窄处剩余管腔直径），根据狭窄度将患者分为轻度狭窄（狭窄度 ≤ 29%）、中度狭窄（狭窄度30%～69%）、重度狭窄（狭窄度70%～99%）、完全闭塞（100%）共4个等级，患者可能存在多个颅内外动脉狭窄病灶，按狭窄最严重的统计。

1.2.2 MTHFR C677T基因检测于入院次日采集所有患者空腹静脉血2 mL，抗凝处理后取血浆，采用徐州赛恩生物试剂有限公司生产的全血基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA，采用荧光聚合酶链式反应（PCR）技术进行基因扩增与基因型测序，MTHFR C677T基因多态性设计MTHFR C677T上游引物5'-AGCAG-GGCTTT-GAGGC-3'，下游引物5'-CATGTCGGTGCATGC-CTT-3'。上、下游引物均购自广州锐博生物科技有限公司。并对电泳鉴定阳性的PCR产物进行基因型测序。

1.2.3 血浆Hcy水平检测采集所有患者空腹静脉血2 mL，按9∶1的比例加入枸橼酸钠，充分混匀后以3 000 r/min转速离心10 min，取血浆标本置于 - 70 ℃保存。采用酶循环法检测血浆Hcy水平，试剂盒购自深圳市新产业生物医学工程股份有限公司。

1.3 观察指标①对比两组患者的一般资料[包括性别、年龄、体质量指数（BMI）、合并高脂血症、糖尿病、冠心病等]。②对比两组患者MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平。③对比不同颅内外动脉狭窄程度的H型高血压组（其中轻度狭窄45例，中度狭窄56例，重度狭窄59例）与参照组的MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平。④分析MTHFR C677T基因多态性与颅内外动脉狭窄程度的关系。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件分析数据，计数资料以[例(%)]表示，采用χ2检验，多组间计数资料比较采用χ2趋势检验；计量资料以(±s)表示，采用t检验，多组间计量资料比较采用重复测量方差分析；通过Logistic回归模型分析MTHFR C677T基因多态性与颅内外动脉狭窄程度的关系。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料两组患者性别、年龄、BMI及高脂血症、糖尿病、冠心病发生率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

表1 两组患者一般资料比较

2.2 MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平H型高血压组患者MTHFR C677T基因CC型占比与C型等位基因频率显著低于参照组，CT、TT型占比及T型等位基因频率、Hcy水平均显著高于参照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 两组患者MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平比较

2.3 不同程度H型高血压脑梗死患者MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平随着狭窄程度的增加，MTHFR C677T基因型为CC型与C型等位基因频率的患者占比均呈不断下降趋势，而有CT、TT型、T型等位基因的患者占比及Hcy水平均呈不断升高趋势，且中、重度H型高血压脑梗死患者CC型基因占比与C型等位基因频率均显著低于轻度患者，T型等位基因频率占比与Hcy水平均显著高于轻度患者，且重度患者Hcy水平显著高于中度患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 不同狭窄程度H型高血压脑梗死患者MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率、血浆Hcy水平比较

2.4Logistic回归模型多因素Logistic回归分析对自变量赋值，以 CC=1，CT=2，TT=3；C=1，T=2，以 CC 基因型与C等位基因作为参照，将与颅内外动脉狭窄程度相关的MTHFR C677T各基因型、等位基因、血浆Hcy纳入多分类Logistic回归模型，结果显示，MTHFR C677T基因型TT、等位基因T、高水平血浆Hcy均为颅内外动脉狭窄的独立危险因素（OR= 6.039、3.217、5.572，均P＜0.05），见表4。

表4 Logistic回归模型检验结果

3 讨论

H型高血压被认为是动脉粥样硬化的独立危险因素，与外周血管疾病、脑血管疾病、高血压与高血压性心脏病密切相关[6]。本研究发现，H型高血压脑梗死患者的血浆Hcy水平显著高于参照组，且随着颅内外动脉的狭窄程度的增加，血浆Hcy水平升高越明显，提示血浆Hcy水平与H型高血压脑梗死颅内外动脉狭窄程度有关。

血浆Hcy水平升高可增强氧化应激反应，其氧化过程中可产生超氧化物和过氧化氢，导致内皮损伤，使平滑肌细胞增殖，促进血小板和粒细胞的激活，且Hcy产生的氧化反应可刺激血管平滑肌细胞增殖，使血管内胶原成分增加，微纤维成分减少，从而使血管壁增厚，破坏血管顺应性[7-8]。因此，血浆Hcy水平越高，患者颅内外动脉狭窄程度越严重，表现为重度患者血浆Hcy水平均高于中、轻度患者。而Hcy是蛋氨酸代谢过程当中生成的一种含硫氨基酸，其表达水平受MTHFR基因的调控，其基因突变可影响Hcy的再甲基化途径，从而影响Hcy的合成与分泌[9]。

本研究发现，MTHFR C677T基因型呈多态性，包括CC、CT、TT型，轻度颅内外动脉狭窄患者的MTHFR C677T基因型以CC型为主，随着颅内外动脉狭窄程度的加重，CC型基因占比逐渐降低，CT、TT型基因占比逐渐升高。王静等[10]研究指出，与MTHFR C677T基因型CC型的酶活性相比，CT型突变酶活性有所降低，TT型酶活性降低更明显，37 ℃时降低50%～60%，46 ℃时降低65%左右。由此可见，MTHFR C677T基因携带T等位基因可降低MTHFRC的酶活性，抑制Hcy去甲基化，致使Hcy含量升高，促进动脉粥样硬化进展，进而加重颅内外动脉狭窄程度。周浩等[11]报道也指出，MTHFR C677T基因突变与脑梗死患者颈动脉粥样硬化形成密切相关。而本研究中发现，与CC基因型比较，CT、TT基因型患者颅内外动脉狭窄等级增加风险分别提高2.332倍、6.039倍，携带T等位基因会明显增加颅内外动脉狭窄程度。

Hcy引起血管功能紊乱的最主要途径之一就是升高血压，有研究表明，血压持续升高，会导致脑动脉粥样硬化，致使脑血管壁增厚，管腔狭窄，长期作用下，脑小动脉会持久性收缩，从而引起脑卒中[12]。本研究发现，血浆Hcy升高患者颅内外动脉狭窄至少增加一个等级的可能性是血浆Hcy正常患者的5.572倍，携带T等位基因可使颅内外动脉狭窄等级增加风险提高3.217倍。提示MTHFR C677T基因型携带T等位基因可通过上调H型高血压脑梗死患者血浆Hcy水平，加重颅内外动脉狭窄程度。

综上，MTHFR C677T基因携带T等位基因可增加H型高血压脑梗死患者颅内外动脉狭窄程度，上调血浆Hcy水平，促进疾病进展，临床应及时进行干预，降低疾病致残率和致死率。