张新图，肖辉

(1.湖南中医药高等专科学校附属第一医院/湖南省直中医医院药学部，湖南 株洲 412000；2.湖南中医药大学附属第一医院药学部，湖南 长沙 410007)

0 引言

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)是伴随于缺血性心脏病的病理生理过程，其受损程度可影响病情的预后，当前临床上尚缺乏针对心肌缺血再灌注损伤的有效治疗手段。雷帕霉素(rapamycin)为新型大环内酯类抗生素，常用于治疗自身免疫性疾病及器官移植排斥反应[1,2]；近年有报道称，雷帕霉素对心肌缺血再灌注损伤动物具有保护作用[3]。本研究通过制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型，进一步探索雷帕霉素的心肌保护作用机制。

1 实验材料

1.1 实验动物

SD 大鼠，清洁级，♀♂各半，体重(180±20)g，由武汉生物制品研究所有限责任公司实验动物室提供，所有动物相关操作均经本单位动物伦理委员会批准。

1.2 药物与试剂

雷帕霉素，美国Sigma 公司，临用前用0.5% 羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose sodium salt, CMC-Na) 配制。氯化硝基四氮唑蓝(nitro blue tetrazolium chloride, NBT)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO) 试剂盒，南京建成生物工程研究所。细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)多克隆抗体及免疫组织化学试剂盒，上海哈灵生物科技有限公司。

1.3 主要仪器

生物显微镜，日本Olympus 公司；自动匀浆机，金瑞鸿捷公司；冷冻离心机，德国Hettich 公司；医学影像分析系统，北京众实迪创公司；紫外可见分光光度计，美国Thermo 公司；十二导联心电图机，日本Nihon 公司；小动物人工呼吸机，安徽正华公司。

2 实验方法

2.1 心肌缺血再灌注损伤模型的制备

参照文献[4]，行冠脉结扎术。简言之，大鼠以戊巴比妥钠麻醉，仰位固定于手术台，颈部备皮、分离气管，连接小动物人工呼吸机以辅助呼吸，四肢连接十二导联心电图机以监测心电图；……