曹玉琳

（南阳市第一人民医院检验科，河南 南阳 473002）

多囊卵巢综合征（PCOS）能够导致患者继发性不孕或者月经紊乱，增加了PCOS 患者病情持续性进展的风险[1,2]。 PCOS 患者病情迁延不愈，不仅显著影响生活质量，同时还增加了患者并发高雄激素血症或者胰岛素抵抗等的风险[3]。 在研究PCOS患者病情进展机理的过程中，越来越多的研究认为，基础生物学分子的改变，能够通过加剧胰岛B细胞功能损伤，进而参与PCOS 的病情进展。 血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达上升，能够通过加剧血管内皮细胞的损伤，影响到胰岛B 细胞血流及新生血管的形成,最终导致血流灌注障碍[4]；内皮抑素（ES）是血管收缩因子，其能够通过加剧血管痉挛，促进血管内皮细胞的损伤，最终诱导胰岛B 细胞的血流动力学紊乱[5]；中长链编码RNA 生长停滞特异性基因5（LncRNA GAS5）能够稳定胰岛B 细胞的代谢状态，提高细胞损伤修复能力[6]。为了深入揭示PCOS 的发生机理，本研究选取我院收治的96 例PCOS 患者为研究对象，探讨VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表达情况以及其与胰岛素抵抗、卵巢间质血流的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2016年1月至2018年7月收治的96 例PCOS 患者为PCOS 组，96 例月经周期正常的育龄期女性为对照组。 PCOS 组，年龄22～37岁，平均27.64±2.43岁，体质量指数（BMI）24.42±2.03kg/m2，腰臀比0.86±0.05。 对照组，年龄22～37岁，平均27.45±2.18岁，BMI22.28±1.79kg/m2，腰臀比0.78±0.05。 两组研究对象的年龄差异无统计学意义（P＞0.05）；PCOS 组的BMI、腰臀比显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 诊断和入选标准：⑴PCOS 的诊断标准参考中华医学会制定的标准[7]；⑵PCOS 患者主要具有以下临床表现：稀发排卵、无排卵、高雄激素血症等；⑶PCOS 患者经超声检查表现为一侧或双侧卵巢中直径2～9mm的卵泡数目≥12 个或卵巢体积＞10cm3； ⑷本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关伦理及保密原则。 排除标准：⑴妇科肿瘤；⑵免疫系统疾病；⑶高催乳素血症；⑷先天性肾上腺增生、分泌雄激素肿瘤；⑸甲状腺功能异常。

1.2 检测方法 常规采集患者肘静脉血4ml，自然凝固后采集上层清亮液体，-20℃放置冰箱保存。采用上海雨婷生物科技公司生产的全自动生化检测仪器（Biotetic-2008） 及该公司配套试剂对血清FPG、Fins 及HbA1c 进行检测；采用ELISA 法检测血清VEGF、ES，配套仪器A4500 酶标仪购自罗氏检测公司。 采用RT-PCR 法对LncRNA GAS5 进行检测，常规Trol 法提取总RNA，纯度检测OD260/OD280 在1.8～2.0，说明提取总RNA 纯度合格，采用AMV 逆转录酶将总RNA 逆转录为cDNA，然后进行逆转录反应, 上游引物：5’-CTTCTGGGCTCAAGTGATCCT-3’,下游引物：5’-TTGTGCCATGA GACTCCATCAGA-3’,内参为GAPDH,上游引物：5’-TTGTGCCATGAGACTCCATCAG-3’;下游引物：5’-GCCCAATACGACCAAATCC-3’。 反应体系为：模板1ul,上游/下游引物各0.5ul，Buffer2μl，dN TPs1μl，Taq 酶0.5μl，cDNA1μl，SYBR -Green1μl，去离子水14ul，总体积20μl，反应条件参照如下：95℃，10min；94℃，45s；63℃，40s；72℃，45s,共45个循环。 以GAPDH 为内参，用公式2-△△Ct计算LncRNA GAS5 的相对表达量。 胰岛素抵抗指数（Homeostasis model assessment resistance index，HOMA-IR）计算方式：空腹血糖水平（FPG，mmol/L）×空腹胰岛素水平（FINS，mIU/L）/22.5。 胰岛素敏感指数（ISI）计算公式：l/( FPG×FINS）结果的自然对数。

1.3 统计学方法 采用SPSS21.0 对本研究的所有数据进行统计学处理，采用±s 表示符合正态分布的计量资料，两组间比较采用两独立样本t 检验；计数资料组间比较采用χ2检验； 两计量资料相关性分析采用Pearson 线性相关分析法；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PCOS 组和对照组的血糖代谢指标比较PCOS 组FPG、HbA1c 与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）；PCOS 组2hPG、FINS、HOMA-IR 测定值高于对照组，ISI 测定值低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；见表1。

表1 PCOS 组和对照组的血糖代谢指标比较（±s）

表1 PCOS 组和对照组的血糖代谢指标比较（±s）

组别PCOS 组对照组t 值P 值n 96 96 FPG（mmol/L） 2hPG（mmol/L） FINS（mmol/L） HbA1c（%） HOMA- IR ISI 5.17±0.54 5.03±0.56 1.763 0.080 7.79±1.04 5.48±0.66 18.375 0.000 9.22±2.09 4.83±0.95 18.736 0.000 5.57±0.87 5.34±0.76 1.951 0.053 1.36±0.29 0.94±0.14 12.779 0.000- 3.78±0.82- 3.04±0.63 7.012 0.000

2.2 PCOS 组和对照组的血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表达比较PCOS 组的血清VEGF、ES 水平高于对照组，LncRNA GAS5 表达水平低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；见表2。

表2 PCOS 组和对照组的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表达比较（±s）

表2 PCOS 组和对照组的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表达比较（±s）

组别 n VEGF（ng/L） ES（μg/L）PCOS 组对照组t 值P 值96 96 977.32±179.24 628.61±144.52 14.842 0.000 255.14±41.31 178.42±36.83 13.585 0.000 LncRNA GAS5（相对表达强度）1.38±0.57 2.34±0.88 8.971 0.000

2.3 PCOS 组和对照组的卵巢间质血流RI、PI 值比较 PCOS 组的卵巢间质血流RI、PI 值低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；见表3。

表3 PCOS 组和对照组的卵巢RI、PI 值比较（±s）

表3 PCOS 组和对照组的卵巢RI、PI 值比较（±s）

组别 n PCOS 组对照组t 值P 值96 96 RI 0.62±0.25 0.90±0.33 6.627 0.000 PI 1.33±0.27 2.40±0.51 18.168 0.000

2.4 PCOS 组血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表达与胰岛素抵抗及卵巢间质血流RI、PI 值的相关性PCOS 患者血清VEGF、ES 与RI、PI、ISI 呈显著负相关（P＜0.05），与HOMA-IR 呈显著正相关（P＜0.05）；LncRNA GAS5 与ISI呈显著正相关（P＜0.05），LncRNA GAS5 与HOMA-IR 呈显著负相关（P＜0.05）；见表4。

表4 相关性分析结果

3 讨论

肥胖或者高血脂症诱导的脂肪细胞过度堆积，能够显著促进氧化应激性损伤，加剧胰岛B 细胞功能障碍[8]。 PCOS 的发生不仅能够加剧月经量或者月经周期的改变，同时还能够影响妊娠结局，远期心血管系统并发症发生率也显著上升[9]。 在研究PCOS 病情进展的分子机制过程中，可以发现血管内皮损伤或者相关调控因子的改变,能够通过对血管新生或者趋化因子富集的影响,最终导致胰岛B 细胞功能障碍。 目前多数研究以探讨CRP 或者其他代谢性因子表达与PCOS 的关系为主，并认为CRP 及相关代谢因子的改变,能够在PCOS 的病情进展过程中发挥重要的作用[10]，但缺乏对PCOS 患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表达情况的分析研究。 本次研究的创新性在于不仅分析了VEGF、ES及LncRNA GAS5 的表达与PCOS 的病情关系，同时还探讨了VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表达与PCOS 患者胰岛素抵抗及卵巢间质血流的关系。

VEGF 作为血管内皮细胞生长因子，主要参与肿瘤或者炎症反应的发生过程。 近年来的研究认为，VEGF 还能够影响上皮细胞的分化成熟过程，导致组织细胞缺血缺氧性损伤；ES 对血管平滑肌细胞的痉挛作用，能够加剧组织器官缺血性损伤；LncRNA GAS5 是非编码RNA 家族成员，能通过参与诱导胰岛B 细胞分化成熟，提高胰岛B 细胞结构蛋白的翻译速率，最终加速胰岛B 细胞的功能修复过程。 已有研究发现，PCOS 患者VEGF 的表达浓度明显上升[11]，但对于VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表达与卵巢间质血流搏动指数（PI）、阻力指数（RI）的分析不足。

本研究对于两组研究对象血糖代谢指标进行分析发现，PCOS 患者餐后2h 血糖（2hPG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均明显高于对照组，而胰岛素敏感指数（ISI）明显低于对照组，提示PCOS 患者存在明显的血糖代谢紊乱和胰岛素抵抗，分析原因主要与长期的高渗高血糖能够诱导氧化应激反应的发生，导致胰岛素受体的损伤，而胰岛素受体敏感性的下降能明显促进胰岛素抵抗的发生有关。 本研究重点探讨了PCOS患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表达的变化，结果显示，PCOS 患者VEGF、ES 的表达浓度的显著上升，而LncRNA GAS5 表达浓度显著下降，表明VEGF、ES 及LncRNA GAS5的异常表达均与PCOS 的病情密切相关。VEGF、ES 的上升不仅能影响组织新生血管的形成，同时还能增加氧化应激性损伤的风险，进一步促进胰岛B 细胞或者卵巢生发上皮细胞的功能障碍，加剧PCOS 的病情进展；LncRNA GAS5 表达下降，使其失去对卵巢生发上皮细胞成熟的诱导功能，导致PCOS 患者无成熟卵泡的形成[12-14]。 杨倩等[15]的研究也认为，PCOS 患者血清中ES 的表达水平可随患者的病情加重而逐渐上升，PCOS 病程越长，高雄激素血症表现越明显，ES 表达水平上升越显著。 PCOS 组卵巢间质血流RI、PI 值低于对照组，提示PCOS 患者存在明显的血流动力学紊乱，这主要与多发卵泡对间质组织中血管壁的机械性压迫作用有关。 相关性分析结果也发现，VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表达与PCOS 患者的胰岛素抵抗及卵巢间质血流指标相关，提示VEGF、ES 及LncRNA GAS5 可以作为临床评估PCOS 患者整体病情的重要参考依据。

综上所述，PCOS 患者血清VEGF、ES 水平升高，LncRNA GAS5 表达降低，且与PCOS 患者胰岛素抵抗及卵巢间质血流变化密切相关。