李玉鹏 ， 李海花 ， 郭晓飞 ， 姚大为 ， 李义海 ， 冯 婧 ， 张金龙 ， 张效生

（1.天津市农业科学院畜牧兽医研究所，天津西青 300381；2.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津西青 300384）

丁酸梭菌（CB）是畜牧业中的替抗产品之一，不仅能够减少养殖过程中抗生素的使用， 保证食品安全，且其作为一种重要的益生菌，还能够为机体提供多种可利用的营养物质， 提高机体的抗炎能力以及免疫力等（Li 等，2018；Liao 等 2015）。 但有关丁酸梭菌介导雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路调控猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制仍不十分清楚。因此，本研究通过丁酸梭菌作用于猪肠上皮细胞 （IPEC-J2）， 研究丁酸梭菌介导mTOR信号通路调控产肠毒素大肠杆菌K88 感染IPEC-J2 炎症反应的分子机制， 为揭示丁酸梭菌调节生猪健康的分子机制， 促进生猪养殖的健康发展提供基础数据和理论依据。

1 材料和方法

1.1 细胞和菌株 猪肠上皮细胞（IPEC-J2）购自上海冠导生物工程有限公司。 产肠毒素大肠杆菌K88（ETEC K88）为天津师范大学实验室保存。

1.2 试剂 RPMI 1640 基础培养液、胎牛血清和DMSO 等常用细胞培养相关试剂均购自美国Gibco 公司。 猪肿瘤坏死因子（TNF-α）和猪白细胞介素-8 （IL-8） 检测试剂盒均购自美国BD 公司。DNA 和RNA 核酸萃取试剂盒、 反转录试剂盒和实时荧光定量PCR 试剂盒均购买于美国GeneCpoeia 公司。 mTOR 抑制剂（ab142151）购自英国Abcam 公司。

1.3 CB 对 ETEC 感染 IPEC-J2 后促炎性细胞因子及mTOR 相对表达量的影响 试验分为3组，即空白对照组（不进行处理）、ETEC 组（ETEC刺激细胞）、CB+ETEC 组 （按顺序使用 CB、ETEC K88 刺激细胞），每组设3 个重复。 将对数生长期细胞接种于6 孔……