李同斌，张玉良，李锡峰

摘要：猪捷申病毒是引起猪多种症状甚至死亡的重要病毒性传染病之一，严重危害养猪业健康发展。正确诊断猪捷申病毒病对防治该病极为关键。本文就该病病原分离鉴定、血清学诊断、分子生物学诊断三方面展开阐述，以期弄清该病诊断方面的研究进展。

关键词：猪捷申病毒;诊断方法;综述

猪捷申病（porcine teschen disease）是由猪捷申病毒（porcine tescho virus，PTV）引起猪中枢神经系统受侵害而导致一系列神经症状的传染病，以感觉过敏、震颤、麻痹、瘫痪和惊厥等为特征[1-3]。1929年在原捷克斯洛伐克捷申地区首次报道，所以又称之为捷申病。此后欧洲、澳大利亚、北美、亚洲和非洲等均有本病的报道。2003年中国农科院哈尔滨兽医研究所首次分离到猪捷申病毒血清1型。到目前为止，猪捷申病已陆续在黑龙江、山东、北京、河南、云南、上海等省市检测出，这说明猪捷申病已经在我国蔓延开来，严重影响了我国的生猪生产，给我国的养猪业造成了较大的损失。

防治该病的关键措施之一是对该病病原的确诊。由于当前猪病复杂，混合感染现象严重且本病血清型众多，因此通过传统诊断方法进行本病的确诊已不现实，并且随着生猪生产不断向规模化、工厂化方向发展，生猪养殖密度不断提高，导致生猪疾病诊断准确性和及时性要求不断增加，因此猪捷申病诊断必须依靠实验室来诊断。自猪捷申病发现以来，很多专家学者对该病的实验室诊断方法进行了各种方式的探索和研究，成功获得了该病的实验室诊断方法，具体如下。

1 猪捷申病毒分离鉴定

采集样品（发病急性期的早期采集喉拭子和脑脊髓液有利于病毒的分离;对于疑似病例，可用粪便样品进行病毒的分离）;将样品用匀浆器研磨制成悬液，反复冻融、离心取上清，并用0.22μm过滤除菌;接种于猪的胚胎、肾、肠或PK-15单层细胞，培养3～6d，观察细胞病变。初代培养病毒滴度往往较低，细胞病变不明显或荧光信号不典型，不易判定，最好盲传几代再观察病变或做荧光染色鉴定。病毒分离耗时长、步骤繁琐、对操作人员技术要求高，仅在实验室使用。

2 血清学诊断

该方法主要是通过检测捷申病毒特异性抗体，来诊断病猪是否患有猪捷申病。血清学诊断方法主要包括：病毒中和试验、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验。

病毒中和试验：先将血清56℃灭活30min;用细胞培养液倍比稀释血清，添加100TCID50/孔病毒，37℃孵育1h;继续添加猪肾细胞悬液，置37℃ CO2培养箱中培养;计算血清中和效价。

间接免疫荧光试验：王瑶等[4]首先构建PTV VP1表达系统，然后利用该系统建立了检测PTV血清抗体的间接免疫荧光方法;利用该方法对哈尔滨周边地区的575份猪血清样品进行检测，PTV感染的阳性率为60.17%。2011年，刘芹防等[5]用全病毒（PTV-8 Jilin/2003株）制备抗原板，以鼠抗猪IgG荧光标记抗体为二抗，建立了检测PTV抗体的间接免疫荧光技术方法，该方法与病毒中和试验方法符合率为94.0%，用该方法检测1，500份临床血清样品，平均阳性率为55.8%。

酶联免疫吸附试验：胡峰等[6]以原核表达纯化的PTV VP1重组蛋白为包被原，建立起猪捷申病毒抗体的间接ELISA检测方法;并运用ELISA检测方法对633份临床样品进行检测，阳性率是88.10%;选取58份临床样品与间接免疫荧光方法作比对试验，两者的符合率是94.80%。酶联免疫吸附试验相对来说比较容易操作，并且对于试验条件和人员的要求都不高，一次能够检测大批量的样本，非常适合养殖场诊断疫病和县级及以下的实验室做流行病学调查。

3 分子生物学检测

猪捷申病毒分子生物学检测方法是基于检测PTV病毒核酸序列发展起来的，猪捷申病毒分子生物学检测方法主要包括RT-PCR以及荧光定量RT-PCR两种方法。猪捷申病毒分子生物学检测方法是诊断猪捷申病最为准确、速度最快还可以一次对大批量样本进行检测的方法，并且该检测技术在检测猪是否感染猪捷申病毒的同时还能检测猪瘟、蓝耳病和圆环病毒，不受其他病毒的干扰，一次检测3～4h就可以全部完成。

RT-PCR，其主要利用的是聚合酶链式反应。就是在RT-PCR中，首先将一条RNA链逆转录成为互补的DNA，然后以此DNA为模板，利用PCR进行DNA的扩增。赵国洪等[7]根据Gen Bank收录的PTV基因序列设计套式引物，建立了检测PTV的套式RT-PCR诊断方法，应用该方法能够从云南省某猪场疑似猪捷申病的病料中检测出PTV核酸阳性;张晓杰等[8]根据Gen Bank登录有关的猪捷申病毒基因序列，并选择保守区域进行引物的设计，应用该方法对43份临床样品进行检测发现，PTV阳性率为23%。

荧光定量RT-PCR检测法，是通过运用PCR扩增反应对每一个循环产物进行荧光信号的实时检测，通过这种方法来实现对起始模板定量及定性的分析。该检测方法广泛应用于分子生物学、基因学以及临床医学领域。王建峰等[9]通过设计引物和TaqMan探针，建立起猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法，用该方法检测来自猪场的156份猪粪便样品，阳性检出率为38.5%，与套式RT-PCR符合率达100%;胡峰等[10]于2012年建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法（基于PTV基因组5'端非编码区保守序列设计引物和TaqMan探针），应用该方法和病毒分离方法分别检测了91份临床样品，检出率分别为79.12%和57.14%，两者的符合率是78.02%;杨涛涛等[11]2019年建立一种检测猪捷申病毒（PTV）的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法，该方法特异性强（对除PTV外的其他常见猪病毒性病原的DNA或cDNA均无特异性的扩增），该方法的敏感性高、重复性好，灵敏度能达到38.3copies/μL（對临床样品的检测荧光定量RT-PCR方法的PTV检出率为68.18%，远高于普通RT-PCR的PTV检出率（22.73%））;秦毅斌等[12]于2020年建立猪捷申病毒（PTV）的TaqMan实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）检测方法，该方法仅对PTV出现特异性扩增反应，与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒等常见猪病毒均无交叉反应，应用所建立的方法对235份临床猪腹泻样品进行检测，PTV阳性样品32份，样品阳性率为13.62%。

4 展望

目前在我国对猪捷申病毒研究较少，尤其是在疫苗方面，至今还未研制。我国是世界上生猪养殖第一大国，猪肉是全国人民最主要的肉食来源，是主要蛋白质的提供者。2018年我国因暴发非洲猪瘟，导致生猪存栏量骤降，猪肉价格创国内历史新高，严重影响普通群众的生活。经过近3年的恢复，生猪存栏才恢复到非洲猪瘟暴发前的90%以上。因此，为了保证我国人民群众的食品安全，我国畜牧兽医等相关部门，必须要做到未雨绸缪，加大对猪捷申病毒的研究力度，尽快研制出相关疫苗，防止猪捷申病在我国出现大范围流行。

参考文献：

[1] 李广德.猪捷申病的流行、诊断与防治[J].现代畜牧科技，2016（3）：105.

[2] 翁善钢.猪捷申病的流行与防控[J].养猪，2015（2）：114-115.

[3] 胡成波，张力，刘士恩.猪捷申病的鉴别诊断与防治[J].兽医导刊，2013（1）：28-29.

[4] 王瑶，田志军，王斌，等.一株猪捷申病毒的分离鉴定及血清学初步调查[J].黑龙江畜牧兽医，2011（3）：14-17.

[5] 刘芹防，刘杉杉，张超范，等.检测猪捷申病毒抗体的间接免疫荧光方法的建立与初步应用[J].中国预防兽医学报，2011（1）：70-72.

[6] 胡峰，刘杉杉，蔺文成，等.猪捷申病毒8型rVP1-ELISA检测方法的建立[J].中国兽医科学，2012（3）：258-263.

[7] 赵国洪，严欢，韩建强，等.云南猪群中猪捷申病毒感染分子生物学诊断[J].养猪，2017（2）：113-115.

[8] 张晓杰，刘业兵，汤德元，等.猪捷申病毒与猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及初步应用[J].中国兽药杂志，2012（4）：10-13.

[9] 王建峰，倪健波，李如松，等.猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J].畜牧与兽医，2016（6）：126-129.

[10] 胡峰，赵亚荣，吕超超，等.猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立[J].中国预防兽医学报，2012（3）：206-210.

[11] 杨涛涛，张凌倩，谢明旺，等.猪捷申病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法的建立[J].中国兽医科学，2019，49（5）：639-643.

[12] 秦毅斌，蘇乾莲，赵硕，等.猪捷申病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用[J].中国兽医杂志，2020，56（11）：37-42+46.