黄 雁，李 月，赵 晶，陈 明

(1.大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034；2.大连民族大学 生命科学学院，辽宁 大连 116600 )

0 引 言

嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)为革兰氏阴性致病菌，在水体中广泛存在，能够感染多种鱼类并引发败血症，给水产养殖业造成经济损失[1-3]。嗜水气单胞菌的致病性与毒力因子的表达密切相关[4]。目前针对嗜水气单胞菌的毒力基因，多采用实时荧光定量PCR技术研究其转录水平，在蛋白表达水平上的研究分析较少。Western Blot技术可通过特异性抗体钓取目的蛋白，能够更直观准确的检测不同条件下毒力蛋白的表达变化，而选取稳定表达的内参蛋白是保障该技术分析准确的先决条件[5-6]。然而，目前尚无嗜水气单胞菌内参蛋白的研究报道，限制了对嗜水气单胞菌毒力蛋白表达及调控的深入研究。

已有报道recA和gap在某些微生物中可作为荧光定量PCR的内参基因[7-8]。嗜水气单胞菌基因组注释表明，recA编码具有DNA修复功能的重组酶RecA，gap-2编码催化3-磷酸甘油醛生成1，3-二磷酸甘油酸的3-磷酸甘油醛脱氢酶Gap-2[9-10]。有报道鸭疫里默氏杆菌的RecA和大肠杆菌GADPH可作为两种菌Western Blot的内参蛋白[11-13]，同源性分析显示，嗜水气单胞菌与鸭疫里默氏杆菌RecA氨基酸序列同源性达到57.07%，Gap-2与大肠杆菌GADPH氨基酸序列同源性达到83.99%。因此，本实验选取嗜水气单胞菌RecA和Gap-2为研究对象，对两种蛋白进行异源表达及抗体制备，并对其作为Western Blot内参蛋白的表达稳定性进行了评价，以期为嗜水气单胞菌毒力蛋白表达及调控的深入研究奠定基础。……