小鼠CCL2蛋白原核表达及纯化分析
2021-12-20马振玲乔柳惠
马振玲, 王 雷, 乔柳惠, 刘 薇
(河南农业大学 生命科学学院,郑州 450002)
CCL2(CC chemokine ligand 2),又称为单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP1),是C-C趋化因子的一员,能够募集单核细胞、巨噬细胞等到炎症部位并调节它们的活性,成纤维细胞、上皮细胞、单核细胞和肿瘤细胞均能够表达CCL2[1-2]。CCL2在多种肿瘤如结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌中高表达,与患者不良预后密切相关[3]。研究表明,CCL2在急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中同样发挥重要功能。AML患者血浆中CCL2含量比正常对照组显著性升高,且CCL2促进单核细胞向AML细胞的迁移[4-5]。同时,CCL2在AML、ALL患者血浆、骨髓及转移部位高表达,提示CCL2与白血病耐药、不良预后呈正相关。以上研究主要集中于CCL2在白血病中的表达量分析,但是CCL2在白血病中的作用机制报道较少。深入研究CCL2在白血病中的作用机制,有助于我们从细胞因子角度开展药物靶向治疗,为白血病的治疗、预后提供新的思路和分子靶点。
前期研究发现,CCL2在白血病骨髓微环境中表达显著性升高,而CCL2的来源以及在白血病中的调控机制尚不清楚[6]。肿瘤微环境中CCL2表达上调的可能原因:(1)肿瘤细胞本身表达CCL2;(2)肿瘤细胞受到刺激产生大量CCL2;(3)基质细胞出于对刺激的应激反应产生CCL2[7]。为了探索外源性CCL2在白血病中的功能,本研究构建了pGEX-4T-CCL2原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(ED3)中表达和纯化了CCL2融合蛋白,初步检测了CCL2重组蛋白对白血病细胞黏附和细胞迁移的影响,旨在为CCL2在白血病功能及机制的深入研究提供材料和奠定基础。
